Detecção de Escherichia coli O157:H7 inoculada experimentalmente em amostras de leite cru por método convencional e PCR multiplex.

RESUMO - Padronizou-se um método de reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex para detecção de Escherichia coli O157:H7 e avaliou-se a eficiência da PCR e de um método de cultivo convencional em placas na detecção desse patógeno experimentalmente adicionado em leite estéril e em leite cru com baixa contagem bacteriana total (média de 4,01 x 10³ UFC/ml) e com alta contagem bacteriana (média de 2,10 x 10(6) UFC/ml). Foram padronizadas duas reações de PCR com o uso dos primers: "A" (RfbF; RfbR e FLICh7F/FLICh7R) e "B" (SLT-IF/SLTIR e SLT-IIF/SLT-IIR). A detecção de E. coli O157:H7 (1UFC/ml) a partir do leite estéril e do leite cru com baixa contaminação bacteriana foi possível quando se utilizou o método de contagem em placas e a PCR. A sensibilidade dos dois métodos foi menor quando se testou o leite cru com alta contaminação microbiana, sendo o método convencional mais sensível. Os resultados indicam que a presença de outros microrganismos, em alta quantidade no leite, dificulta a detecção de E. coli O157:H7 pelos métodos utilizados. ABSTRACT - This experiment was carried out in order to evaluate the effect of the raw milk bacterial count on the efficiency of a multiplex polymerase chain reaction and a conventional plate count method for detection of Escherichia coli O157:H7. This pathogen was experimentally inoculated into sterile milk, raw milk with low bacterial count (count mean of 4.01 x 10³ cfu/ml) and, raw milk with high bacterial count (mean 2.10 x 10(6) cfu/ml). Two protocols of PCR were standardized using primers "A" (Rfbf and Rfbr and FLICh7F/FLICh7R) and "B" (SLT-IF/SLTIR and SLT-IIF/SLT-IIR). Both conventional plate count and PCR methods were able to detect the presence of E. coli O157:H7 in either sterile milk or raw milk with low bacterial count initially inoculated with 1cfu of E. coli O157:H7 per ml. The sensibility of both methods for high-contaminated raw milk samples was lower, being the conventional approach more sensitive. These results indicate that high bacterial count in raw milk can affect E. coli O157:H7 detection.

Bibliographic Details

Main Authors:	GARCIA, P. M., ARCURI, E. F., BRITO, M. A. V. P., LANGE, C. C., BRITO, J. R. F., CERQUEIRA, M. M. O. P.
Other Authors:	P. M. Garcia, UFMG; Edna Froeder Arcuri, Embrapa Gado de Leite; Maria Aparecida Vasconcelos Paiva e Brito, Embrapa Gado de Leite; Carla Christine Lange, Embrapa Gado de Leite; José Renaldi Feitosa Brito, Embrapa Gado de Leite; Mônica Maria Oliveira Pinho Cerqueira, UFMG.
Format:	Artigo de periódico biblioteca
Language:	Portugues pt_BR
Published:	2009-03-17
Subjects:	PCR multiplex, Antígeno O157, Antígeno H7, Patógeno, Leite,
Online Access:	http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/596259 https://doi.org/10.1590/S0102-09352008000500029
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