Detección del efecto citotóxico de la alfa hemolisina de E. coli (Hly A) en leucocitos polimorfonucleares neutrófilos mediante citometría de flujo
La viabilidad de leucocitos polimorfonucleares neutrófilos (PMN) expuestos a alfa hemolisina ( Hly A) de E. coli se evaluó detectando, por citometría de flujo, la fluorescencia que células permeabilizadas al propidio manifiestan con éste último intercalado en el ADN celular. El sobrenadante hemolítico causó fluorescencia en PMN de manera directamente proporcional a la dosis hemolítica, no así los sobrenadantes control no hemolíticos. A dosis menores a 0,5 HU50/ml las células excluyeron propidio manteniendo viabilidad, aunque aumentaron de manera leve y temporal su tamaño, y volvieron al nivel basal en término de 1 hora, sugiriendo que existe daño en membrana sin entrada de propidio, y que se presenta recuperación celular de dichas lesiones, al menos a corto plazo. La fluorescencia de PMN disminuyó luego de 15 minutos de exposición, fenómeno que se previno mediante la quelación de Ca+2extracelular con N,N,N',N'- tetraacetato ( EGTA ); ello indica que es la entrada de calcio a la célula la causante de la pérdida de señal. La disminución o quelación de Ca+2 extracelular incrementó la fluorescencia, pero solo la quelación simultánea de Ca+2 externo e interno la mantuvo inalterada. Se concluye que la entrada de Ca+2 a la célula activa mecanismos que disminuyen la fluorescencia inicial; que niveles bajos o quelación de Ca+2 extracelular facilitan la entrada de propidio, lo que incrementa la fluorescencia, y que la disminución de la señal se evita solo si el Ca+2 intracelular y el extracelular se encuentran quelados. Los hallazgos de este estudio, en conjunto con datos de otros autores, se toman como base para formular una cadena hipotética de acontecimientos que explica las observaciones citométricas en PMN expuestos a Hly A, con énfasis en el significado del aumento en tamaño celular en ausencia de entrada de propidio a la célula.
| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Digital revista |
| Language: | Spanish / Castilian |
| Published: |
Editorial Nacional de Salud y Seguridad Social
2000
|
| Online Access: | http://www.scielo.sa.cr/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0253-29482000000200003 |
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| Summary: | La viabilidad de leucocitos polimorfonucleares neutrófilos (PMN) expuestos a alfa hemolisina ( Hly A) de E. coli se evaluó detectando, por citometría de flujo, la fluorescencia que células permeabilizadas al propidio manifiestan con éste último intercalado en el ADN celular. El sobrenadante hemolítico causó fluorescencia en PMN de manera directamente proporcional a la dosis hemolítica, no así los sobrenadantes control no hemolíticos. A dosis menores a 0,5 HU50/ml las células excluyeron propidio manteniendo viabilidad, aunque aumentaron de manera leve y temporal su tamaño, y volvieron al nivel basal en término de 1 hora, sugiriendo que existe daño en membrana sin entrada de propidio, y que se presenta recuperación celular de dichas lesiones, al menos a corto plazo. La fluorescencia de PMN disminuyó luego de 15 minutos de exposición, fenómeno que se previno mediante la quelación de Ca+2extracelular con N,N,N',N'- tetraacetato ( EGTA ); ello indica que es la entrada de calcio a la célula la causante de la pérdida de señal. La disminución o quelación de Ca+2 extracelular incrementó la fluorescencia, pero solo la quelación simultánea de Ca+2 externo e interno la mantuvo inalterada. Se concluye que la entrada de Ca+2 a la célula activa mecanismos que disminuyen la fluorescencia inicial; que niveles bajos o quelación de Ca+2 extracelular facilitan la entrada de propidio, lo que incrementa la fluorescencia, y que la disminución de la señal se evita solo si el Ca+2 intracelular y el extracelular se encuentran quelados. Los hallazgos de este estudio, en conjunto con datos de otros autores, se toman como base para formular una cadena hipotética de acontecimientos que explica las observaciones citométricas en PMN expuestos a Hly A, con énfasis en el significado del aumento en tamaño celular en ausencia de entrada de propidio a la célula. |
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