Variabilidad genética y expresión del antígeno B de Echinococcus granulosus y sus implicancias en el diagnóstico de la hidatidosis
Echinococcus granulosus, el agente causal de la hidatidosis quística, existe como un número de genotipos (G1-G10) que difieren en características biológicas de importancia como la especificidad del hospedador intermediario y la infectividad en humanos. En la Argentina se han identificado cinco genotipos (G1, G2, G5, G6 y G7), cuatro de ellos capaces de infectar al hombre. Estos genotipos se agrupan filogenéticamente en tres clusters G1/G2, G5 y G6/G7. Uno de los principales antígenos presentes en el líquido del quiste hidatídico, el antígeno B (AgB) es una lipoproteína oligomérica codificada por una familia de al menos cinco genes (AgB1- AgB5). El AgB nativo fue ampliamente utilizado en el diagnóstico de la hidatidosis y probablemente esté involucrado en la evasión de la respuesta inmune. Sin embargo la función y localización de esta proteína en el parásito no ha sido descripta con certeza. En esta tesis se muestra que el AgB es extremadamente polimórfico en E.granulosus. Cada cluster de genotipos posee diferente tipo y número de secuencias correspondientes al AgB, algunas de ellas bajo presión de selección. El análisis exhaustivo de estas secuencias permitió desarrollar métodos sensibles y específicos para determinar la presencia de transcriptos de AgB en los clusters de genotipos y en los estadíos del ciclo de vida del parásito. El genotipo G1 expresa los cinco genes, sin embargo en el genotipo G7 se encontraron sólo transcriptos funcionales de AgB1, AgB3 y AgB4. Las secuencias relacionadas al AgB2 presentes en el genotipo G7 corresponderían a pseudogenes. Se describió por primera vez la presencia del AgB en oncosferas y adultos, siendo el AgB3 y AgB5 los más expresados. Asimismo, se obtuvieron proteínas recombinantes a partir de algunas de las variantes de AgB descriptas y se generaron anticuerpos monoclonales subunidad específicos. El análisis en conjunto de hibridación in situ e inmunohistoquímica del estadío protoescólex mostraron una localización del AgB2 y AgB4 en tegumento, ventosas, almohadilla rostelar y corpúsculos calcáreos mientras que la localización del AgB1 se determinó sólo en corpúsculos calcáreos. Las diferentes localizaciones de cada subunidad de AgB podrían indicar un rol diferencial de estas proteínas en el establecimiento y/o supervivencia del parásito. Por último se describe el estudio del potencial de dos de las subunidades de AgB para el inmunodiagnóstico de la hidatidosis en el marco de la Red Sudamericana de Serología Hidatídica.
| Main Author: | |
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| Other Authors: | |
| Format: | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis biblioteca |
| Language: | spa |
| Published: |
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
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| Subjects: | ANTIGENO B, VARIABILIDAD GENETICA, ECHINOCOCCUS GRANULOSUS, HIDATIDOSIS, INMUNOLOCALIZACION, ANTIGEN B, GENETIC VARIABILITY, HYDATID DISEASE, IMMUNOLOCALIZATION, |
| Online Access: | http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4052_Kamenetzky http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n4052_Kamenetzky_oai |
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| Summary: | Echinococcus granulosus, el agente causal de la hidatidosis quística, existe como un número de genotipos (G1-G10) que difieren en características biológicas de importancia como la especificidad del hospedador intermediario y la infectividad en humanos. En la Argentina se han identificado cinco genotipos (G1, G2, G5, G6 y G7), cuatro de ellos capaces de infectar al hombre. Estos genotipos se agrupan filogenéticamente en tres clusters G1/G2, G5 y G6/G7. Uno de los principales antígenos presentes en el líquido del quiste hidatídico, el antígeno B (AgB) es una lipoproteína oligomérica codificada por una familia de al menos cinco genes (AgB1- AgB5). El AgB nativo fue ampliamente utilizado en el diagnóstico de la hidatidosis y probablemente esté involucrado en la evasión de la respuesta inmune. Sin embargo la función y localización de esta proteína en el parásito no ha sido descripta con certeza. En esta tesis se muestra que el AgB es extremadamente polimórfico en E.granulosus. Cada cluster de genotipos posee diferente tipo y número de secuencias correspondientes al AgB, algunas de ellas bajo presión de selección. El análisis exhaustivo de estas secuencias permitió desarrollar métodos sensibles y específicos para determinar la presencia de transcriptos de AgB en los clusters de genotipos y en los estadíos del ciclo de vida del parásito. El genotipo G1 expresa los cinco genes, sin embargo en el genotipo G7 se encontraron sólo transcriptos funcionales de AgB1, AgB3 y AgB4. Las secuencias relacionadas al AgB2 presentes en el genotipo G7 corresponderían a pseudogenes. Se describió por primera vez la presencia del AgB en oncosferas y adultos, siendo el AgB3 y AgB5 los más expresados. Asimismo, se obtuvieron proteínas recombinantes a partir de algunas de las variantes de AgB descriptas y se generaron anticuerpos monoclonales subunidad específicos. El análisis en conjunto de hibridación in situ e inmunohistoquímica del estadío protoescólex mostraron una localización del AgB2 y AgB4 en tegumento, ventosas, almohadilla rostelar y corpúsculos calcáreos mientras que la localización del AgB1 se determinó sólo en corpúsculos calcáreos. Las diferentes localizaciones de cada subunidad de AgB podrían indicar un rol diferencial de estas proteínas en el establecimiento y/o supervivencia del parásito. Por último se describe el estudio del potencial de dos de las subunidades de AgB para el inmunodiagnóstico de la hidatidosis en el marco de la Red Sudamericana de Serología Hidatídica. |
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