Subpoblaciones de células B y su importancia en la patogénesis del Lupus Eritematoso Sistémico.
En pacientes con Lupus Eritematoso Sistémico (LES), los linfocitos B (LB) autorreactivos producen autoanticuerpos dirigidos contra antígenos nucleares (Mok, 2003). Aun no es claro si LB productores de autoanticuerpos poseen características fenotípicas o funcionales de alguna subpoblación especifica de LB y existen controversias con respecto a si son células de memoria originadas de forma timo dependiente o independiente. Observaciones de nuestro laboratorio han evidenciado un incremento en la expresión de TLR9 en LB de pacientes con LES (Zorro S et al, tesis de maestría, sometido), otros autores han demostrado en sanos incremento en la expresión de TLR9 en LB con fenotipo de memoria (CD19+CD27+IgM+) (Cognasse et al, 2005, Bernasconi et al 2003). Los LB reconocen DNA que contiene dinucleótidos de citosina-guanina hipometilados (CpGs), el cual es internalizado por el receptor de células B (BCR) y unido por TLR9, evento que se postula ocurre en el LES, con la subsiguiente estimulación de la vías de activación. En este proceso ocurren cambios en la composición de las balsas lipídicas (LR) de la membrana, cambio de isotipo de los anticuerpos y producción de IL-10 que pudieran ser importantes en la activación persistente de los LB autorreactivos. Estas subpoblaciones de LB autorreactivos activados serian responsables de la patogénesis de esta entidad por actuar como células presentadoras de autoantígenos a los LT y por producir autoanticuerpos causantes de las lesiones de órgano blanco por esto es de suma importancia conocer su fenotipo y funcionalidad ante estímulos como CpG. Como objetivo general nos proponemos determinar las diferencias en las subpoblaciones de LB circulantes y en las alteraciones inducidas por la activación con secuencias CpG en pacientes con LES leve y severo con respecto a controles sanos, para lograr este objetivo nos proponemos evaluar 20 individuos con Lupus Leve y 20 con lupus severo y compararlos con individuos sanos. La frecuencia de las subpoblaciones y expresión de TLR9 de pacientes y controles se determinara mediante citometría de flujo, para establecer los cambios en las subpoblaciones y la expresión de co-estimuladoras, células B seleccionadas por columna se cultivaran y estimulara con secuencias sintéticas que contienen CpG (ODN-2006) y posteriormente se evaluaran por citometría de flujo. La evaluación de los componentes de las balsas lipídicas se realizará después de su aislamiento mediante gradientes de sucrosa y posterior evaluación por inmunoblot. Se espera encontrar que los pacientes con Lupus presente un mayor número de células B de memoria circulantes que estas expresen mas TLR9 que otras subpoblaciones y que presenten respuesta alteradas a los CpG con activación y reclutamiento anormal de moléculas en las balsas lipídicas.
| Main Author: | |
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| Other Authors: | |
| Format: | Informe de investigación biblioteca |
| Language: | spa |
| Published: |
Universidad de Antioquia
2011-12-14
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| Subjects: | Lupus, TLR9, Células B, |
| Online Access: | https://repositorio.minciencias.gov.co/handle/20.500.14143/40321 |
| Tags: |
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| Summary: | En pacientes con Lupus Eritematoso Sistémico (LES), los linfocitos B (LB) autorreactivos producen autoanticuerpos dirigidos contra antígenos nucleares (Mok, 2003). Aun no es claro si LB productores de autoanticuerpos poseen características fenotípicas o funcionales de alguna subpoblación especifica de LB y existen controversias con respecto a si son células de memoria originadas de forma timo dependiente o independiente.
Observaciones de nuestro laboratorio han evidenciado un incremento en la expresión de TLR9 en LB de pacientes con LES (Zorro S et al, tesis de maestría, sometido), otros autores han demostrado en sanos incremento en la expresión de TLR9 en LB con fenotipo de memoria (CD19+CD27+IgM+) (Cognasse et al, 2005, Bernasconi et al 2003). Los LB reconocen DNA que contiene dinucleótidos de citosina-guanina hipometilados (CpGs), el cual es internalizado por el receptor de células B (BCR) y unido por TLR9, evento que se postula ocurre en el LES, con la subsiguiente estimulación de la vías de activación. En este proceso ocurren cambios en la composición de las balsas lipídicas (LR) de la membrana, cambio de isotipo de los anticuerpos y producción de IL-10 que pudieran ser importantes en la activación persistente de los LB autorreactivos. Estas subpoblaciones de LB autorreactivos activados serian responsables de la patogénesis de esta entidad por actuar como células presentadoras de autoantígenos a los LT y por producir autoanticuerpos causantes de las lesiones de órgano blanco por esto es de suma importancia conocer su fenotipo y funcionalidad ante estímulos como CpG.
Como objetivo general nos proponemos determinar las diferencias en las subpoblaciones de LB circulantes y en las alteraciones inducidas por la activación con secuencias CpG en pacientes con LES leve y severo con respecto a controles sanos, para lograr este objetivo nos proponemos evaluar 20 individuos con Lupus Leve y 20 con lupus severo y compararlos con individuos sanos. La frecuencia de las subpoblaciones y expresión de TLR9 de pacientes y controles se determinara mediante citometría de flujo, para establecer los cambios en las subpoblaciones y la expresión de co-estimuladoras, células B seleccionadas por columna se cultivaran y estimulara con secuencias sintéticas que contienen CpG (ODN-2006) y posteriormente se evaluaran por citometría de flujo. La evaluación de los componentes de las balsas lipídicas se realizará después de su aislamiento mediante gradientes de sucrosa y posterior evaluación por inmunoblot.
Se espera encontrar que los pacientes con Lupus presente un mayor número de células B de memoria circulantes que estas expresen mas TLR9 que otras subpoblaciones y que presenten respuesta alteradas a los CpG con activación y reclutamiento anormal de moléculas en las balsas lipídicas. |
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