Protocolo de extração de DNA genômico para os principais fungos fitopatogênicos do arroz.
Para obter êxito no uso das técnicas de biologia molecular é fundamental a obtenção de DNA genômico de boa qualidade, livre de impurezas e com a maior integridade possível. O objetivo do trabalho foi estabelecer e padronizar protocolo para a extração de DNA genômico dos patógenos de arroz de maior importância no Brasil, Bipolaris oryzae, Microdochium oryzae, Rhizoctonia solani, Sarocladium oryzae e Magnaporthe oryzae (anamorfo: Pyricularia oryzae), a partir do método de extração de DNA de plantas descrito por Dellaporta et al. (1983). Os 14 isolados fúngicos provenientes da Coleção de Microrganismos Multifuncionais e Fitopatógenos da Embrapa Arroz e Feijão foram cultivados em meio líquido caldo batata dextrose e em meio sólido ágar batata dextrose a 25 ºC, por sete a dez dias, e a extração de DNA genômico foi realizada para as massas miceliais obtidas. Foram obtidas concentrações de DNA superiores a 370 ng/μL, tanto para as amostras com micélio liofilizado macerado quanto para as amostras com micélio raspado da placa, sem liofilizar e sem macerar. As razões entre as absorbâncias a 260 nm e a 280 nm apresentaram-se entre 1,8 e 2,2 para 13 das 14 amostras de DNA extraídas de micélio liofilizado macerado e para 12 das 14 amostras de DNA extraídas do micélio raspado da placa. As razões entre as absorbâncias a 260 nm e a 230 nm estiveram na faixa de 1,8 a 2,2 para seis dos 14 isolados testados com o micélio liofilizado macerado e para três dos 14 isolados testados com micélio raspado da placa. O método de extração de DNA Dellaporta modificado mostrou-se eficiente para a extração de DNA dos fungos patogênicos ao arroz testados.
| Main Authors: | , , , |
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| Other Authors: | |
| Format: | Folhetos biblioteca |
| Language: | pt_BR pt_BR |
| Published: |
2019
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| Subjects: | Arroz, Extração, DNA, Fungo, Micélio, |
| Online Access: | http://www.infoteca.cnptia.embrapa.br/infoteca/handle/doc/1112790 |
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| Summary: | Para obter êxito no uso das técnicas de biologia molecular é fundamental a obtenção de DNA genômico de boa qualidade, livre de impurezas e com a maior integridade possível. O objetivo do trabalho foi estabelecer e padronizar protocolo para a extração de DNA genômico dos patógenos de arroz de maior importância no Brasil, Bipolaris oryzae, Microdochium oryzae, Rhizoctonia solani, Sarocladium oryzae e Magnaporthe oryzae (anamorfo: Pyricularia oryzae), a partir do método de extração de DNA de plantas descrito por Dellaporta et al. (1983). Os 14 isolados fúngicos provenientes da Coleção de Microrganismos Multifuncionais e Fitopatógenos da Embrapa Arroz e Feijão foram cultivados em meio líquido caldo batata dextrose e em meio sólido ágar batata dextrose a 25 ºC, por sete a dez dias, e a extração de DNA genômico foi realizada para as massas miceliais obtidas. Foram obtidas concentrações de DNA superiores a 370 ng/μL, tanto para as amostras com micélio liofilizado macerado quanto para as amostras com micélio raspado da placa, sem liofilizar e sem macerar. As razões entre as absorbâncias a 260 nm e a 280 nm apresentaram-se entre 1,8 e 2,2 para 13 das 14 amostras de DNA extraídas de micélio liofilizado macerado e para 12 das 14 amostras de DNA extraídas do micélio raspado da placa. As razões entre as absorbâncias a 260 nm e a 230 nm estiveram na faixa de 1,8 a 2,2 para seis dos 14 isolados testados com o micélio liofilizado macerado e para três dos 14 isolados testados com micélio raspado da placa. O método de extração de DNA Dellaporta modificado mostrou-se eficiente para a extração de DNA dos fungos patogênicos ao arroz testados. |
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