Considerações estatísticas na análise de dados de expressão gênica gerados pela técnica de RT-qPCR.
A transcriptase reversa (RT) seguida de quantificação utilizando a técnica da reação em cadeia da polimerase (qPCR) em tempo real ou, simplesmente reverse transcription-qPCR (RT-qPCR), é um método in vitro para amplificação enzimática de sequências definidas de DNA complementar obtido a partir do RNA. A técnica de RT-qPCR é uma das mais utilizadas em experimentos de quantificação da expressão gênica por ser considerado um dos métodos mais sensível e específico de quantificação gênica dos que outros utilizados para esta finalidade. No entanto, para obter resultados, pela técnica de RT-qPCR, que possam ser adequadamente analisados é necessário que o experimento tenha um desenho experimental com tratamentos, ensaios, unidade experimental e delineamento bem definidos. Muitas vezes, as considerações estatísticas, principalmente, no delineamento experimental para distribuição dos genes e das amostras (biológicas e técnicas) na placa de PCR (para controle de variação) não são consideradas e, dados gerados dessa maneira não são confiáveis. Após obtenção dos resultados da quantificação é primordial, antes de qualquer análise, avaliar a distribuição dos dados por meio de testes de normalidade. Baseado nisso, recomenda-se, para a comunidade acadêmica, como um roteiro prático para o correto delineamento experimental e a correta análise estatística dos dados para experimentos que utilizam a técnica de RT-qPCR.
| Main Authors: | , |
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| Other Authors: | |
| Format: | Folhetos biblioteca |
| Language: | pt_BR por |
| Published: |
2014
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| Subjects: | RT-qPCR, Expressão gênica, Expressão gênica relativa, RT-PCR, Genetic processes, Genética animal, Genética molecular, Gene expression, Genetics, |
| Online Access: | http://www.infoteca.cnptia.embrapa.br/infoteca/handle/doc/1007398 |
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| Summary: | A transcriptase reversa (RT) seguida de quantificação utilizando a técnica da reação em cadeia da polimerase (qPCR) em tempo real ou, simplesmente reverse transcription-qPCR (RT-qPCR), é um método in vitro para amplificação enzimática de sequências definidas de DNA complementar obtido a partir do RNA. A técnica de RT-qPCR é uma das mais utilizadas em experimentos de quantificação da expressão gênica por ser considerado um dos métodos mais sensível e específico de quantificação gênica dos que outros utilizados para esta finalidade. No entanto, para obter resultados, pela técnica de RT-qPCR, que possam ser adequadamente analisados é necessário que o experimento tenha um desenho experimental com tratamentos, ensaios, unidade experimental e delineamento bem definidos. Muitas vezes, as considerações estatísticas, principalmente, no delineamento experimental para distribuição dos genes e das amostras (biológicas e técnicas) na placa de PCR (para controle de variação) não são consideradas e, dados gerados dessa maneira não são confiáveis. Após obtenção dos resultados da quantificação é primordial, antes de qualquer análise, avaliar a distribuição dos dados por meio de testes de normalidade. Baseado nisso, recomenda-se, para a comunidade acadêmica, como um roteiro prático para o correto delineamento experimental e a correta análise estatística dos dados para experimentos que utilizam a técnica de RT-qPCR. |
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