Desenvolvimento de um ELISA baseado na captura da enzima malato desidrogenase citoplasmática recombinante de Trypanosoma congolense
A tripanossomose africana é uma hemoparasitose transmitida pela mosca tsé-tsé que afeta o homem e os animais, causando grandes perdas económicas. Os principais agentes causadores são o T. congolense, T. vivax e T. brucei spp. A principal medida de controlo é a quimioterapia e quimioprofilaxia, embora limitada pelo número de tripanocidas disponíveis. Assim, o diagnóstico torna-se uma ferramenta importante pois permite o desenho de tratamento adequados, todavia, os métodos existentes não são satisfatórios. Neste contexto abriu-se espaço para o desenvolvimento dum teste ELISA de captura de antigénios circulantes, que detecta infeções ativas, com a vantagem de poder ser adaptado em formato ``dipstick´´. A malato desidrogenase citoplasmática (cMDH) foi escolhida como antigénio candidato devido à sua abundância na corrente sanguínea de hospedeiros após lise do tripanossoma, e a possibilidade de deteção enzimática. A fim de expressar a forma recombinante da cMDH, a sequência codificante da proteína foi clonada no plasmídeo pTZ57R/T, seguido da sub-clonagem no plasmídeo de expressão pET32a na estirpe Escherichia coli BL21(DH3). Após indução por IPTG foi produzido uma proteína solúvel. Com a proteina imunizou-se dois coelhos e duas galinhas para obtenção de anticorpos policlonais, os quais foram usados para desenvolver o teste de ELISA de captura. A cMDH recombinate, é uma proteina com 55 kDa de peso molecular. Os anticorpos produzidos em coelho e em galinha mostraram capacidade de reconhecimento da cMDH nativa de T. congolense presente em soro de bovinos infectados, num sistema ELISA de captura e imunoblot. Este estudo demonstra que os anticorpos policlonais produzidos são capazes de capturar a cMDH nativa em soro de animais infectados por T. congolense com diferentes níveis de parasitémia. Estes resultados sugerem que o sistema de captura do cMDH pode ser desenvolvido e validado como um ELISA de captura para o diagnóstico de campo de infecções Trypanosoma congolense. (Texte intégral)
| Main Authors: | , , |
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| Format: | conference_item biblioteca |
| Language: | por |
| Published: |
Universidade Eduardo Mondlane
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| Subjects: | L72 - Organismes nuisibles des animaux, L73 - Maladies des animaux, 000 - Autres thèmes, |
| Online Access: | http://agritrop.cirad.fr/584356/ http://agritrop.cirad.fr/584356/3/584356.pdf |
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| Summary: | A tripanossomose africana é uma hemoparasitose transmitida pela mosca tsé-tsé que afeta o homem e os animais, causando grandes perdas económicas. Os principais agentes causadores são o T. congolense, T. vivax e T. brucei spp. A principal medida de controlo é a quimioterapia e quimioprofilaxia, embora limitada pelo número de tripanocidas disponíveis. Assim, o diagnóstico torna-se uma ferramenta importante pois permite o desenho de tratamento adequados, todavia, os métodos existentes não são satisfatórios. Neste contexto abriu-se espaço para o desenvolvimento dum teste ELISA de captura de antigénios circulantes, que detecta infeções ativas, com a vantagem de poder ser adaptado em formato ``dipstick´´. A malato desidrogenase citoplasmática (cMDH) foi escolhida como antigénio candidato devido à sua abundância na corrente sanguínea de hospedeiros após lise do tripanossoma, e a possibilidade de deteção enzimática. A fim de expressar a forma recombinante da cMDH, a sequência codificante da proteína foi clonada no plasmídeo pTZ57R/T, seguido da sub-clonagem no plasmídeo de expressão pET32a na estirpe Escherichia coli BL21(DH3). Após indução por IPTG foi produzido uma proteína solúvel. Com a proteina imunizou-se dois coelhos e duas galinhas para obtenção de anticorpos policlonais, os quais foram usados para desenvolver o teste de ELISA de captura. A cMDH recombinate, é uma proteina com 55 kDa de peso molecular. Os anticorpos produzidos em coelho e em galinha mostraram capacidade de reconhecimento da cMDH nativa de T. congolense presente em soro de bovinos infectados, num sistema ELISA de captura e imunoblot. Este estudo demonstra que os anticorpos policlonais produzidos são capazes de capturar a cMDH nativa em soro de animais infectados por T. congolense com diferentes níveis de parasitémia. Estes resultados sugerem que o sistema de captura do cMDH pode ser desenvolvido e validado como um ELISA de captura para o diagnóstico de campo de infecções Trypanosoma congolense. (Texte intégral) |
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