Optimización y Validación de una PCR en Tiempo Real para la Rápida Identificación de Bacillus thuringiensis, Simulador de Bacillus anthracis

RESUMEN Introducción: Bacillus anthracis es uno de los agentes de guerra biológica más empleados en el mundo. Sin embargo, en los laboratorios de defensa biológica es conveniente utilizar en muchas ocasiones otras bacterias parecidas a Bacillus anthracis pero menos peligrosas o apatógenas. Uno de los principales simuladores de Bacillus anthracis es Bacillus thuringiensis, debido a su elevada homología con B. anthracis y a su nula patogenicidad para el ser humano. Objetivos: El objetivo del presente estudio es desarrollar y validar una PCR en tiempo real para la rápida identificación del ADN de Bacillus thuringiensis, agente empleado muy a menudo en los simulacros para entrenamiento de las Unidades Operativas de toma de muestras NBQ de las FAS. Material y Métodos: La identificación del simulador Bacillus thuringiensis se ha realizado mediante la amplificación y detección con una sonda de hidrólisis de un fragmento de 69 pares de bases del gen cry1A, el cual es específico de esta bacteria. Tras optimizar las condiciones de amplificación probando tres temperaturas diferentes de hibridación/extensión, se procedió a realizar la validación del método desarrollado. Resultados: La nueva PCR en tiempo real desarrollada presentó una eficiencia del 93%, así como una elevada linealidad (coeficiente de regresión R2 0,9993). El límite de detección al 95% de probabilidad fue de 13 equivalentes de genoma completo por reacción. Tanto la inclusividad como la exclusividad del método fueron del 100%. Conclusiones: El método molecular desarrollado por el Laboratorio de Biología Molecular del INTA permite una rápida identificación del ADN de Bacillus thuringiensis, simulador de Bacillus anthracis, con unas elevadas sensibilidad y especificidad analíticas.

Bibliographic Details

Main Authors:	Bassy Álvarez,O, Larigauderie,G, Ortega García,MªV, Granja Albarellos,C, Cabria Ramos,JC
Format:	Digital revista
Language:	Spanish / Castilian
Published:	Ministerio de Defensa 2018
Online Access:	http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1887-85712018000200084
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