Regulación de la expresión génica de leptina por estradiol en células placentarias
La placenta produce un amplio número de moléculas esenciales para el establecimiento y el mantenimientodel embarazo. En este contexto, la leptina presenta un papel importante en la reproducción. La leptina es una proteína de 16 kDa codificada por el gen LEP, y fue descripta originalmente como unamolécula producida por el tejido adiposo involucrada en la regulación del metabolismo a nivel central. Sinembargo, se ha sugerido que esta proteína presenta otras funciones durante la gestación, particularmente en laplacenta, donde se detectó su expresión y la de sus receptores. La síntesis de leptina en células trofoblásticas está modulada por diferentes agentes endógenos, pero aún nose comprende totalmente cómo se regula su expresión génica. En este trabajo, se analizó el efecto del 17β-estradiol (E2) sobre la expresión de leptina en la placentahumana utilizando dos modelos experimentales: la línea celular BeWo, derivada de coriocarcinoma, y explantosde placentas humanas a término. Se ha observado la estimulación de la expresión de leptina endógena en respuesta a E2, a través de ensayosde Western blot y qRT-PCR. Este efecto fue dosis y tiempo dependiente e involucraría a los receptores deestrógenos, ya que el antagonista ICI 182,780 inhibió la acción del E2. Además, experimentos de transfeccióntransitoria mostraron que el tratamiento con E2 aumentó la actividad transcripcional del promotor de leptina, yla región promotora comprendida entre -1951 pb y -1847 pb sería necesaria y suficiente para observar losefectos del E2. La acción de E2 también involucraría receptores de membrana, ya que la incubación con este esteroidepromovió la fosforilación de MEK, ERK 1/2 y AKT en explantos placentarios. Apoyando esta hipótesis, el análogo E-BSA, que no atraviesa la membrana plasmática, indujo la expresión de leptina en ambos modelosexperimentales, y activó rápidamente las vías de señalización de las MAPKs y PI3K. Los efectos del E2 y del E-BSA fueron bloqueados por inhibidores farmacológicos de las vías MAPKs y PI3K asícomo también a través de la expresión de mutantes dominantes negativas de MEK, ERK 1/2 y AKT, sugiriendoque estas cascadas de señalización estarían involucradas en la regulación de la expresión de leptina. Por otro lado, se ha demostrado la presencia del receptor de estrógenos alfa (ERα) en el núcleo y en lamembrana plasmática de las células BeWo. Esta proteína podría mediar los efectos genómicos y no genómicosdel E2. Apoyando esta idea, la sobreexpresión de ER potenció los efectos del E2, mientras que la disminuciónde los niveles de ERα a través de un ARN de interferencia específico disminuyó los efectos del E2 y del E-BSAsobre la expresión de leptina. El análisis in silico del promotor de leptina mostró posibles sitios ERE y half ERE para la unión de receptores ER, además de distintas secuencias que podrían interactuar con los factores de transcripción AP-1, CREB, NFκBy Sp1. La expresión de isoformas wild type o mutantes dominantes negativas de estas proteínas mostraron unaposible interacción entre ellas y los ERs, la cual podría estar implicada en la regulación de la expresión deleptina placentaria. En conclusión, este trabajo demuestra que el E2 induce la expresión de leptina en células trofoblásticas através de acciones genómicas y no genómicas, donde participan receptores de estrógenos de membrana ynucleares, distintos factores de transcripción y diferentes vías de transducción de señales. Estos mecanismospueden estar desregulados en distintas patologías del embarazo.
| Main Author: | |
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| Format: | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis biblioteca |
| Language: | spa |
| Published: |
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
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| Subjects: | LEPTINA, 17SS-ESTRADIOL, PLACENTA, EXPRESION GENICA, RECEPTOR DE ESTROGENOS, VIAS DE TRANSDUCCION DE SEÑALES, LEPTIN, GENE EXPRESSION, ESTROGEN RECEPTOR, SIGNAL TRANSDUCTION PATHWAYS, |
| Online Access: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5272_Gambino http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n5272_Gambino_oai |
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