Estudio sobre polipétidos funguistáticos producidos por una cepa de Bacillus subtilis

E1 objeto del trabajo fué la purificación y el estudioquímico y biológico de un preparado funguistático producido poruna cepa de Bacillus subtilis, derivada de 1a productora de bacilomicina A. Para dar una conveniente ubicación a los materiales en estudiodentro del panorama de los péptidos antibióticos de origenbacteriano, al cual pertenecen, se realizó una somera descripciónde un gran número de sustancias de esta naturaleza que han sidohalladas. En la misma se informó sobre los problemas que presentala química de esta clase particular de péptidos activos, ypermitió también formular un contexto de conclusiones más o menosgenerales que fueron discutidas (Capitulo I). La obtención de 1a cepa productora y del material antibiótico,asi como los métodos para la evaluación de 1a actividad deeste último, fueron luego descriptos (Capítulos II y III), desarrollándoseenseguida las experiencias de purificación (Capítulo IV), que hubo razonables motivos para emprender con las técnicasde distribución en contracorriente. Estas experiencias, ademásde involucrar un amplio examen de las caracteristicas de particióndel antibiótico, resultaron en el aislamiento de tres péptidossimilares en varias de sus propiedades químicas, pero quepresentaban diferente actividad biológica, comomostraron los estudiosa que fueron sometidos posteriormente (Capitulos V y VI). Por cromatografía sobre papel de los productos de hidrólisisácida total de los tres péptidos asi obtenidos, se identificaronen todos los casos los mismos aminoácidos: ácido aspártico, ácidoglutámico, prolina, serina y tirosina. El análisis cuantitativodemostró que en los tres péptidos 1a relación molar entrelos aminoácidos era la misma: 3:1:1:1:1 , en el orden arriba indicado. Las recuperaciones obtenidas fueron del 80 al 92 % delpeso; lo axiguo del material disponible y su no absoluta pureza,no permitieron mejorarlas. Esto deja abierta la posibilidad deque existan en las moléculas de estos péptidos, otros fragmentosno detectados en este estudio. No se observaron entre estos péptidos, diferencias en lo querespecta a1 grado de bloqueo por grupos amida de los carboxilosno comprometidos en uniones peptídicas. Se halló prácticamentela misma cantidad de nitrógeno amidico por unidad de masa. Las medidas de la extinción á 275 mμ, permitieron calcularlos pesos moleculares correspondientes a un residuo de tirosinapor mol de péptido. Estos valores, y los obtenidos a partir de 1a medición del nitrógeno amidico, concordaron con los que puedendeducirse de la composición en aminoácidos. Para las tres fraccionesresultaron ser algo superiores á 1000. La ausencia de derivados N-dinitrofenil sustituídos en elproducto de reacción con 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (FDNB),indica que ninguno de los tres péptidos posee grupos amino libres;esto coincide con la imposibilidad de revelarlos sobre papel conninhidrina. La disminución de la intensidad de la mancha de tirosinaen los cromatogramas de los hidrolizados de dichos productosde reacción con FDNB, sugiere la formación de un derivado O-sustituido de la tirosina. Los espectros antibióticos de los tres péptidos, demostraronser significativamente diferentes. Es interesante destacar que 1a fracción III, menos activa sobre la mayoría de los microorganismosprobados, inhibió al Trichophyton tonsurans a menor concentraciónque las otras dos fracciones. La fracción II resultó particularmenteactiva sobre Penicillium chrysogenum, y 1a I inhibióel desarrollo de una cepa de Corynebacterium diphteriae. Determinaciones realizadas con otras fracciones purificadas,aisladas en los estudios preliminares, indican la existencia dealguna correlación entre el poder hemolítico y la actividad antibiótica,en el sentido de que un aumento de ésta, es acompañadopor un incremento de aquél. Con excepción de los valores del coeficiente de partición,ningún otro de los criterios experimentales utilizados en estetrabajo permitió establecer alguna distinción entre las propiedadesquímicas de los tres péptidos, que pudiera servir de base paraexplicar su diferente actividad biológica. Estas observacionessugieren que esas diferencias pueden residir en la estructura. Si bien los resultados del análisis cuantitativo de aminoácidos, 1a ausencia de residuo N-terminal y los valores concordanteshallados para el peso molecular, son consistentes con adjudicara los materiales estudiados un grado de pureza razonablementeelevado, es necesario indicar que ellos no se comportaroncomo estrictamente puros en las distribuciones que condujeron asu aislamiento. Ello, al mismo tiempo que reproduce una situaciónmuy frecuente en 1a resolución de péptidos antibióticos deorigen bacteriano, demuestra hasta qué punto llegan las exigenciasque deben satisfacer los métodos de fraccionamiento, paraalcanzar el adecuado poder resolutivo. Todos los datos.obtenidos coinciden en ubicar estos antibióticosdentro del grupo de las bacilomicinas, con las que concuerdanen las propiedades fisicas, químicas y biológicas estudiadas.

Bibliographic Details

Main Author:	Burachik, Moisés
Other Authors:	Paladini, Alejandro C.
Format:	info:eu-repo/semantics/doctoralThesis biblioteca
Language:	spa
Published:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Online Access:	https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n1162_Burachik http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=tesis_n1162_Burachik_oai
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