Quantificação de bacteriófagos em amostras biológicas: comparação de métodos com plaqueamento em ágar.
Resumo: O ensaio em placa sobre dupla camada de ágar é um método bem estabelecido para quantificação de bacteriófagos, porém laborioso. Aqui, comparamos a quantificação de bacteriófagos em amostras intestinais de frangos por meio desse método clássico e por um procedimento mais simples e rápido, o ensaio em placa com gota. Após administração de um coquetel com fagos, frangos foram eutanasiados em intervalos regulares e o conteúdo cecal foi removido. As amostras foram serialmente diluídas e simultaneamente quantificadas por ambos os ensaios. Para o ensaio em dupla camada de ágar, sobrecamadas de ágar foram preparadas com cada diluição da amostra previamente homogeneizada com a bactéria hospedeira e adsorvida, e então distribuídas sobre placas de cultivo individuais contendo meio de cultura. No ensaio em gota, alíquotas de todas as diluições foram diretamente dispensadas sobre a superfície de uma mesma placa de cultivo previamente preparada com a sobrecamada da bactéria hospedeira. Após incubação, as UFPs foram contadas e transformadas em escala logarítmica para análise estatística. Houve associação significativa (p ≤ 0,05) entre as técnicas (R2 = 0,8921). Todavia, o ensaio em placa com gota estimou números mais altos de fagos comparado ao ensaio em placa sobre dupla camada de ágar, numa média de 0,42 log. O ensaio em placa com gota foi efetivo para quantificar bacteriófagos, estimando títulos aproximados de fagos em relação ao ensaio em placa sobre dupla camada e possibilitando reduzir o número de placas de cultivo e o tempo necessário para a análise de muitas amostras. Abstract:Double agar overlay plaque assay is a well-stablished technique to enumerate bacteriophages, but also cumbersome to perform. We compared plating methods using the double agar overlay plaque assay and a simpler and faster protocol, the small drop plaque assay (spot test), to enumerate bacteriophages in intestinal samples from broilers. After receiving a phage cocktail, broilers were euthanized at regular intervals to obtain cecal content. Samples were serially diluted and phages were concurrently enumerated by both plaque assays. For the double agar overlay, monolayers with each dilution were prepared from samples previously homogenized and adsorbed with the host bacterium and then placed on overlay culture in individual plates. In the small drop plaque assay, all dilutions from a single sample were placed onto a unique plate previously prepared with a monolayer of the host strain. Plates were incubated and PFUs were counted and logtransformed before statistical analysis. Analyses revealed a significant association (p ≤ 0.05) between the evaluated methods (R2 = 0.8921). However, the small drop assay estimated higher phage numbers when compared to the double agar overlay assay at an average of 0.42 log. The small drop plaque assay was useful for determining the bacteriophages number in the analyzed samples, estimating approximate phage titers, thus saving time and reducing the number of plates for analysis of large amount of samples.
| Main Authors: | , , , |
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| Other Authors: | |
| Format: | Folhetos biblioteca |
| Language: | por |
| Published: |
2024
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| Subjects: | Bacteriófago, Título de fago, Enumeração, Método em placa, Phage titer, Enumeration, Plaque counting, Frango, Bacteriophages, Chickens, |
| Online Access: | http://www.infoteca.cnptia.embrapa.br/infoteca/handle/doc/1166953 |
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