Transformation génétique de l'hévéa. Rapport annuel, octobre 1999 - septembre 2000
La mise au point de la transformation génétique des cals friables embryogènes d'hévéa par Agrobacterium tumefaciens s'est heurtée à des problèmes de faible niveau de transformation et de réactions importantes du matériel végétal au stress subit lors de la transformation. Une augmentation significative de l'activité 13—glucuronidase (GUS), protéine codée par le gène rapporteur gusA, et donc du niveau de transformation a été obtenue à la suite d'une pré-culture des cals friables et des agrobactéries dans un milieu de prolifération des cals sans calcium. L'apport de régulateurs de croissance dans ce même milieu a stimulé l'activité cellulaire des tissus pré-cultivés et de plus forts niveaux d'activité GUS ont été enregistrés. Les travaux présentés dans ce rapport ont montré que le stress survenant lors de la transformation, même réduit au minimum, engendrait systématiquement le brunissement des tissus et la croissance des agrobactéries. Toutefois, la stimulation de la reprise de croissance des tissus transformés a pu être obtenue par 2 moyens. Le premier a consisté à augmenter l'apport de régulateurs de croissance dans le milieu de décontamination. Cela a permis la prolifération des tissus sans brunissement ni contamination dû à la présence des agrobactéries dans les cals. Cependant, l'activité GUS chutait lorsque l'apport exogène en régulateurs de croissance augmentait. Le second a nécessité le repiquage des cals transformés sous forme de petits agrégats cellulaires. Dans ce cas, une très forte reprise de croissance des tissus a été notée ce qui a permis de supprimer la phase d'élimination des agrobactéries par lavage. L'activité GUS a été observée dans des petits amas cellulaires après 6 mois de culture. Toutefois, le taux de prolifération de ces amas reste faible et limite la phase d'établissement des lignées cellulaires transgéniques qui seront utilisées pour la régénération de plantes. Nous allons donc focaliser nos études sur les facteurs limitant le développement des cellules transgéniques.
| Main Authors: | , , , |
|---|---|
| Format: | monograph biblioteca |
| Language: | fre |
| Subjects: | F30 - Génétique et amélioration des plantes, F60 - Physiologie et biochimie végétale, F02 - Multiplication végétative des plantes, |
| Online Access: | http://agritrop.cirad.fr/576885/ http://agritrop.cirad.fr/576885/1/MONTORO-2000-%20Ra.pdf |
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