Caractérisation des isolats du virus de la mosaïque du concombre sur bananier (Musa sp.). Mise au point d'une méthode de détection immunoenzymatique de type E.L.I.S.A.
L'objectif principal de ce travail est de proposer une méthode de de détection immunoenzymatlque (ELISA) du CMV (virus de la mosaïque du concombre) sur le bananier et plus particulièrement sur des rejets de bananiers (baïonnettes) dont le méristème est mis en culture pour produire des vitroplants qui sont commercialisés. Nous avons tout d'abord commencé par identifier les isolats de CMV provenant de bananiers par la méthode d'indexage sur hôtes différentiels et par la méthode de double immunodiffusion sur milieu gélosé. Nous avons montré que les isolats appartiennent aux deux groupes de CMV déjà décrits. Puis, nous avons optimisé certains paramètres de la méthode "sandwich" ELISA pour le diagnostic. Nous trouvons que le tampon d'extraction citrate 0,5 M associé au Triton X100 0,1 % et à l' acide thioglycolique 0,1 % donne des résultats fiables et une bonne répétitivité. L'emploi d'un seul type d'antisérum s'est révélé trop spécifique. Pour élargir le spectre de détection, nous avons utilisé un mélange d'antisérums des deux groupes. La polyvalence obtenue est moyenne. Nous avons ensuite comparé différents systèmes d'antisérums utilisables avec la méthode ELISA indirecte. Le système polyvalent permet d'obtenir de bons résultats; il est plus sensible et possède un spectre de détection plus large que la méthode "sandwich". Le contrôle des "baïonnettes" suppose de connaître les parties de la plante les plus riches en virus. Dans ce but, nous avons étudié la distribution du virus dans la plante grâce aux méthodes ELISA . Nous avons observé que le virus se retrouve dans toutes les parties du bananier, mais il semble plus concentré dans les feuilles jeunes et la partie médiane du limbe .Dans les" baïonnettes ", le virus est plutôt localisé dans les gaines et les feuilles .Les échantillons de bulbe donnent des réponses variables. Des essais de dosage montrent qu'il est possible de faire du "dosage comparatif" à condition d'utiliser un même protocole et un antigène de référence fixe. Des essais de transmission mécanique ou par vecteur montrent que les inoculations artificielles ne réussissent qu'à un très faible pourcentage. Ainsi, dans le cadre de la détection du CMV dans les "baïonnettes" têtes de clone ,nous suggérons d'utiliser la méthode ELISA "sandwich" avec un système polyvalent, compte tenu de la présence de ces réactifs sur le marché. Cependant l'utilisation dès que possible de la méthode indirecte polyvalente serait préférable. MOTS-CLEFS: Musacée, bananier, virus, mosaïque du concombre, détection, E.L.I.S.A.. Titre anglais: "Characterization of Cucumber Mosaic Virus strains isolated from Banana; development of an immunoenzymatic assay E.L.I.S.A. for the virus detection".
| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | thesis biblioteca |
| Language: | fre |
| Published: |
ENITAB
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| Subjects: | H20 - Maladies des plantes, U30 - Méthodes de recherche, |
| Online Access: | http://agritrop.cirad.fr/564098/ |
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