Caracterização do processo de morte celular na interação Theobroma cacao / Crinipellis perniciosa

A morte celular programada (PCD) é uma parte intrínseca do ciclo de vida de organismos multicelulares, incluindo plantas e animais. O Processo de PCD está associado a mudanças morfológicas e bioquimicas, geneticamente crontoladas, e tem sido muito melhor caracterizado em animais. Em plantas, este evento encontra-se relacionado a senescência, desenvolvimento de elementos traqueais e resposta a patógenos. A expressão acentuada de enzimas como lipases, cisteinas proteases, superóxido dismutase, peroxidase também está relacionada ao processo de morte celular. O desenvolvimento da vassoura-de-bruxa, doença causada pelo fungo Crinipellis perniciosa, tem provocado inúmeros danos econômicos e sociais à região Sul da Bahia. Durante a infecção, o cacaueiro apresenta uma sintomatologia característica de morte celular, reduzindo a qualidade do produto a ser comercializado e consumido. Este estudo tem por objetivo caracterizar o evento de PCD como resposta a infecção de C. perniciosa no cacaueiro. Com esta finalidade, plãntulas de cacau da variedade susceptível catongo foram inoculadas com esporos de C. perniciosa e meristemas infectados foram coletados em três diferentes estágios de infecção. A confirmação da indução dos sintomas por C. perniciosa foi realizada por meio da análise de RT-PCR do gene do indutor de necrose expresso exclusivamente pelo patógeno. A análise da fragmentação do DNA por meio de técnica de TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling) foi proferida utilizando a metodologia sugerida por Gavrielli, 1992 com modificações. Meristemas de cacau foram fixados em paraformaldeído 4%, embebidos em parafina e cortados com a utilização de microtomo. A detecção dos fragmentos de DNA foi realizada utilizando-se "In situ Cell Death Detection Kit" (Roche, Mannheim, Germany), sendo os núcleos observados e fotografados em microscópio de fluorescência. A análise de morte celular por TUNEL em meristemas de plantas lenhosas incluidas em parafinas ainda não foi descrita na literatura. Este trabalho também demonstra que o procedimento de inclusão em parafina é uma metodologia eficiente para a análise da fragmentação de DNA em experimentos de TUNEL. Apesar desta análise mostrar a fragmentação do DNA genômico de cacau em plantas infectadas, a formação do marcador observado em células em PCD não foi constatado até o momento na interação cacau/C. perniciosa. Em outras interações patógeno/hospedeiro esta quebra ocorrida no nucleossomo com formação de fragmentos de 180 pb também não tem sido visualizada (Pasqualini et al, 2003). Evidencia-se, portanto, um processo de degradação do DNA do cacaueiro em meristemas ou em folhas em estágios avançados de infecção por C. perniciosa.

Bibliographic Details

Main Authors:	Santos, Thais Bomfim, Ceita, Geruza Oliveira, Macêdo, Joci Neuby Alves, Bittencourt, Livia Maria Cabral, Da Silva, D.C., Gramacho, Karina Peres, Mariano, Andréa Cristina, Micheli, Fabienne, Pereira, Gonçalo Amarante Guimarães, Cascardo, Julio Cezar M.
Format:	conference_item biblioteca
Language:	por
Published:	s.n.
Subjects:	H20 - Maladies des plantes,
Online Access:	http://agritrop.cirad.fr/525669/
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