Etude du repositionnement dans le riz d'un transposon porteur d'un transgène d'intérêt

Le repositionnement non lié d'un transgène d'intérêt porté par un transposon depuis le site donneur d'intégration du transgène est une des stratégies permettant d'éliminer dans la descendance des plantes transformées, le gène sélectionnable ainsi que toute séquence plasmidique indésirable ne contribuant pas directement au produit final. En plus de l'élimination de tout le site donneur, cette stratégie permet, si elle fonctionne efficacement, d'aboutir à autant d'effets de position du transgène que de sites de réintégration du transposon. De manière à tester cette méthode chez le riz (#Oryza sativa# L.), le gène synthétique #cry1B# codant l'endotoxine insecticide de la bactérie #Bacillus thuringiensis#, inséré entre les jonctions droite et gauche du transposon Ac9, lui-même cloné dans la partie 5' non traduite d'une fusion 35S-gfp servant de marqueur d'excision, a été introduit via #Agrobacterium tumefaciens# dans un cultivar sensible aux foreurs de tiges (cultivar Ariete, sous-espèce japonica). L'ADN-T porte en outre le gène codant la transposase du transposon Ac contrôle du promoteur 35S et le gène sélectionnable #hph# de résistance à l'hygromycine. 84 plantes ont été régénérées et l'intégrité et l'organisation des séquences introduites ainsi que l'excision du transposon, démontrée par la présence d'un site donneur libéré de son transposon (EDS, Empty Donor Site), ont été contrôlés respectivement par des analyses de type Southern et PCR. Alors que des réarrangements importants de l'ADN-T intégré ont été observés en To, 36,6% des transformants ont montré la présence d'un EDS. Neuf événements de transformations ont été sélectionnés sur la base du nombre de copies intégrées, de l'intégrité des séquences introduites et de la preuve de l'excision du transposon. Une analyse Southern de la descendance de ces lignées a montré l'héritabilité germinale de la réinsertion du transposon ainsi qu'une fréquence de transposition élevée. Dans les lignées analysées, un nombre moyen de 1 à 4,5 nouvelles insertions est observée dans 4 à 85% des descendants suivant la lignée considérée. La ségrégation attendue du gène #crylB# a été observée dans 21 plantes et une analyse Western de ces plantes a montré l'expression de ce gène après réintégration. Les séquences flanquantes des sites d'intégration de l'ADN-T ont aussi été amplifiées et séquencées. L'effet de la position du site de réinsertion sur le niveau d'expression du transgène ainsi que l'isolement des régions flanquant ces sites de réinsertion sont en cours au laboratoire. Cette étude est la première du genre en ce qui concerne les plantes monocotylédones d'intérêt agronomique.

Bibliographic Details

Main Author:	Cotsaftis, Olivier
Format:	thesis biblioteca
Language:	fre
Published:	UM2
Subjects:	F30 - Génétique et amélioration des plantes, Oryza sativa, transfert de gène, transposition de gènes, biotechnologie végétale, méthode, http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_5438, http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_24846, http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_27529, http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_27590, http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_4788,
Online Access:	http://agritrop.cirad.fr/477016/
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