Perfil da expressão de genes candidatos para aquisição da competência durante o crescimento ovocitário em bovinos.
O objetivo do presente estudo foi estudar o perfil da expressão de genes candidatos para a aquisição da competência durante o crescimento ovocitário em bovinos utilizando ovócitos de diferentes tamanhos provenientes de várias categorias de folículos. Os genes candidatos foram selecionados por estarem possivelmente envolvidos com a aquisição da competência (BMP15, OOSP1. H1FOO. H2A, H3A. H4, SLBP, DNMTI, DNMT3B. HAT, HDAC e SUV39H 1). Para determinar o tamanho dos ovócitos a serem utilizados, foi realizado um pré- experimento, em que os folículos pré-antrais furam classificados morfologicamente, agrupados em diferentes categorias em primordial, primário, secundário inicial e secundário final. Após a classificação, os ovócitos de cada folículo foram individualmente isolados e medidos. Folículos pré-antrais e antrais foram isolados de ovários de vacas Nelore (Bos taurus indicusv. por dissociação mecânica utilizando o Tissue Chopper. Para o isolamento dos ovócitos, os folículos foram expostos à colagenase tipo II (0,5 mg/ml) e então submetidos a sucessivas pipetagens. Os ovócitos foram medidos através do programa Motic images Plus 2.0 e classificados de acordo com seu diâmetro nas seguintes categorias: I) ovócitos de folículos primordiais: diâmetro de até 20 Mm; 2) ovócitos de folículos primários: 25 a 35 Mm; 3) ovócitos de folículos secundários iniciais: 40 a 60 Mm e 4) ovócitos de folículos secundários finais; 65 a 85 Mm. Para a obtenção dos ovócitos oriundos de folículos antrais incompetentes e competentes, foram utilizadas as medidas de 100 a 120 Mm e acima de 128 Mm respectivamente. O RNA total foi extraído de 4 pools de 25 ovócitos, de cada categoria de folículo, e os transcritos dos genes foram quantificados por qPCR. Os valores de expressão dos genes alvos foram normalizados pela expressão do gene constitutivo CYC A. Os resultados foram analisados através do teste não paramétrico Kruskall Wallis, para comparar os tamanhos de folículos e ovócitos e avaliar o efeito do tamanho do ovócito na quantidade de expressão gênica. O nível de significância considerado foi P<0.05. Os resultados mostraram que os transcritos da H2A, H.3. H4 e SUV39H1 não diferiram (P>0.05) entre os grupos de ovócitos de folículos antrais e pré-antrais. A expressão da OOSP1. SLBP. BMP15. H1FOO. DNMTI. DNMT3B e HAT foram menores (P<0.05) em ovócitos pré-antrais quando comparados com os de folículos antrais. A H3A foi o único gene em que foi detectado a expressão de RNAm em ovócito de folículo primordial. De todos os genes estudados. apenas a HODAC apresentou diferença significativa entre ovócitos de folículos antrais compctemes e incompetentes. Os resultados sugerem que o acúmulo dos estoques dos genes analisados ocorre antes do estágio final da folículogênese e provavelmente não são marcadores para a competência. A HOAC Ioi o único gene que pode estar relacionado à competência do ovócito, pois mostrou uma diminuição (P<0.05) no nível de transcrito nos grupos de ovócitos competentes quando comparados com o grupo de antrais iniciais (1 a 3mm).
| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Teses biblioteca |
| Language: | pt_BR por |
| Published: |
2014-08-27
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| Subjects: | Folículos, Ovócitos, Pré-antrais, Expressão gênica, |
| Online Access: | http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/993519 |
| Tags: |
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