Produção de proteínas recombinantes para avaliação de resposta celular contra Mycobacterium bovis.

Tuberculose bovina é uma enfermidade infecciosa, causada pela bactéria Mycobacterium bovis. Esta enfermidade tem acometido rebanhos de vários países, inclusive do Brasil, causando problemas econômicos e de saúde pública. Animais infectados com M. bovis, primariamente, apresentam resposta imune celular e, devido a isso, o teste intradérmico com PPD (Purified Protein Derivative) é amplamente utilizado nos programas de controle da doença. Entretanto, a tuberculinização possui algumas desvantagens, como a detecção de reações cruzadas e necessidade de imobilização dos animais em dois momentos distintos. Além disso, bovinos submetidos à intradermorreação tornam-se temporariamente anérgicos, e em casos de reações inconclusivas, não podem ser re-testados por pelo menos 60 dias. Uma forma de minimizar esses problemas é o desenvolvimento de testes de diagnósticos in vitro, nos quais a capacidade de antígenos estimularem a liberação de citocinas é mensurada. O objetivo deste trabalho foi produzir as proteínas PE5 e ESAT-6 de M. bovis em sistema heterólogo de expressão para posterior avaliação da indução de resposta celular de bovinos. Os genes pe5 e esat-6 foram amplificados por PCR (Polymerase Chain Reaction), clonados em plasmídeo pGEM-T Easy e subclonados em plasmídeo pRSet-C. A expressão dos genes foi verificada por eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida, bem como por Western blot com anticorpo monoclonal anti-histidina. Foi possível observar proteínas de 15 e 16 kDa, que correspondem, respectivamente, às massas moleculares estimadas das proteínas recombinantes PE5 e ESAT-6 fusionadas a cauda de histidina. No Western blot, as proteínas recombinantes foram reconhecidas pelo anticorpo monoclonal. ESAT-6 é um dos antígenos de M. bovis mais bem documentados, demonstrando sensibilidade de moderada a alta em diversos testes de diagnóstico e a proteína PE-5 demonstrou anteriormente alta especificidade. Portanto, a utilização destas proteínas, individualmente ou em conjunto, poderá incrementar o diagnóstico da tuberculose bovina em testes de tuberculinização intradérmica e de dosagem de interferon-γ.

Bibliographic Details

Main Authors:	FARIAS, T. A., ARAUJO, F. R., RAMOS, C. A. N., SOUZA, I. I. F., RUSSI, L. S., LUIZ, H. L., BACANELLI, G., ROSINHA, G. M. S., SOARES, C. O., ELISEI, C., OSÓRIO, A. L. A. R., JORGE, K. S. G., SANTOS, L. R
Other Authors:	Bolsista DTI/CNPq na Embrapa Gado de Corte; FLABIO RIBEIRO ARAUJO, CNPGC; Doutorando na Universidade Federal Rural de Pernambuco.; Bolsista DTI/CNPq na Embrapa Gado de Corte; Bolsista DTI/CNPq na Embrapa Gado de Corte; Mestranda na Universidade Federal de Mato Grosso do Sul.; Mestranda na Universidade Federal de Mato Grosso do Sul; GRACIA MARIA SOARES ROSINHA, CNPGC; CLEBER OLIVEIRA SOARES, CNPGC; Bolsista DTI/CNPq na Embrapa Gado de Corte; Pesquisador na Universidade Federal de Mato Grosso do Sul; Pesquisador na Universidade Federal de Mato Grosso do Sul; Bolsista DTI/CNPq na Embrapa Gado de Corte.
Format:	Parte de livro biblioteca
Language:	pt_BR por
Published:	2011-02-14
Subjects:	Tuberculose bovina., Mycobacterium Bovis, Sanidade Animal.,
Online Access:	http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/877016
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