Caracterización de bacterias y enzimas celulolíticas del compostaje con residuos de café
Se realizó el aislamiento e identificación de bacterias celulolíticas en la fase termofílica de pilas de compostaje con residuos de café. Se utilizaron medios de cultivo con carboximetilcelulosa y celulosa cristalina como única fuente de carbono. De 20 cepas aisladas, A-SRETCR, M-SRETCR y N-SRETCR presentaron mayor actividad celulolítica, evaluada por formación de halos de hidrólisis, producción de azúcares reductores y zimogramas. Estas cepas fueron identificadas como Bacillus subtilis mediante características morfológicas, fisiológicas, bioquímicas y análisis de secuencia 16S rDNA. Los extractos enzimáticos de las tres cepas presentaron actividad endocelulasa y exocelulasa hasta de 0.519 y 0.254 U/ml respectivamente. Los extractos proteicos crudos de las cepas A-SRETCR y M-SRETCR, presentaron actividad endocelulasa desde las 24 hasta las 144 h de cultivo, evaluada en zimogramas que revelaron más de dos bandas de actividad con tamaño aproximado de 46, 55 y 176 kDa. Se purificaron parcialmente las CMCasas del extracto proteico de B. subtilis M-SRETCR, mediante precipitación con etanol e isoelectroenfoque; resultaron con punto isoeléctrico de 2.5, y con la mayor actividad a pH 5.5 y 8.0 a 55 ºC. El análisis molecular reveló tres secuencias de celulasas con diferentes sitios de restricción AluI, con similitudes de 94 y 96 % con endocelulasas de diferentes cepas de B. subtilis y 62 % de identidad con secuencias péptido señal. Estas características sugieren que estas enzimas son diferentes a las reportadas por otros autores y entre sí. Así mismo, evidencian que M-SRETCR, posee más de dos celulasas, ubicándolo dentro de las pocas especies del género Bacillus que poseen dos o tres celulasas. Los resultados obtenidos en este estudio abren la posibilidad de hacer uso de estas enzimas, en la obtención de sustratos fermentables para la producción de energía a partir de los residuos generados en grandes cantidades por la agroindustria de café.
| Main Authors: | , , , , |
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| Format: | Texto biblioteca |
| Language: | spa |
| Published: |
Tapachula, Chiapas, México El Colegio de la Frontera Sur
2017
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| Subjects: | Bacillus subtilis, Bacterias, Celulasas, Residuos de café, Elaboración de composta, Enzimología, Frosur, |
| Online Access: | http://ecosur.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1017/2604 |
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