Protoplast liberation, cell wall reconstitution, and callus proliferation in Coffea arabica L. callus tissues
El procedimiento para la liberación y el cultivo de células de café fue definido para permitir manipulación genética dentro del género Coffea. Se encontró como combinación óptima, 2,5 por ciento de pectinasa, 3,5 por ciento Driselasa, 0,51 molal manitol y 6 mM Ca Cl2 con pH de 5,5 para liberación de protoplastos de células de callo de café, después de 6 a 7 horas de incubación a 50 rpm. La preparación de los protoplastos fue purificada mediante filtración a través de cribas de acero inoxidable de 150 ¿m y 38 ¿m. El filtrado se colectó en tubos de centrífuga; se centrifugó a 100 g por 3 minutos, se aspiró el líquido supernadante, y se resuspendió el precipitado de protoplastos en 3 ml del medio para la regeneración de paredes celulares (CWRM). Se repitió este procedimiento tres veces para diluir las enzimas y eliminar los restos celulares. Finalmente, el precipitado fue resuspendido en 1 a 2,5 ml de CWRM para conseguir una densidad para el contaje de 10 a la 5 protoplastos por ml. Suspensiones de protoplastos de 0,5 ml fueron cultivados en placas multiseptadas en condiciones de iluminación difusa y alta humedad. Después de 5 días el CWRM fue diluido con medio de crecimiento (GM) y se comprobó la regeneración de paredes celulares mediante 0,1 por ciento calcoflúor y microscopía de fluorescencia. Se observó la regeneración de la pared celular y proliferación de callo aproximadamente un 30 por ciento de los cultivos
| Main Authors: | , , |
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| Format: | biblioteca |
| Published: |
Abr-
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| Subjects: | COFFEA ARABICA, BOURBON, CALLO, CULTIVO DE TEJIDOS, PROTOPLASTOS, PARED CELULAR, |
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