Actas
Las protoplastos de planta pueden ser usados en estudios de transformación en que se modifica el genoma de la célula de la planta. La toma de DNA extraño se consigue por fusión de célula-célula, toma de cromosomas aislados o vectores portadores de DNA. Los protoplastos son también muy útiles como sistemas simples para el estudio del metabolismo de la célula e interacciones huésped-patógeno. La pared de la célula puede ser removida con el uso de enzimas líticas en presencia de estabilizadores osmóticos, para impedir que los protoplastos estallen. Los protoplastos se pueden obtener de la mayoría de las partes de las plantas y de cultivos de tejidos. El objeto de este trabajo era el de elaborar un método para el aislamiento de grandes números de protoplastos del cacao con miras a su uso en el estudio de interacciones celulares entre el cacao y el patógeno fungal C. perniciosa. Se incubó material de hojas de cacao en etapas específicas de desarrollo (F1, F2, 11 y 12) en mezclas líticas que contenían diferentes concentraciones de Cellulisina Pectolyase. El rendimiento de protoplastos fue superior a partir de hojas jóvenes en la fase temprana de expansión (F2) cuando se incubaron con 1 por ciento de Pectolyase y 2 por ciento de Cellulisin en 0,6M de mannitol como estabilizador osmótico. Se hicieron tentativas por aumentar los rendimientos de protoplastos a partir de hojas más viejas mediante una variedad de tratamientos incluyendo una maceración antes de la incubación lítica, una mayor agitación en la mezcla de enzima lítica e infiltración al vacío de la enzima en el tejido de la hoja. Sin embargo los aumentos obtenidos fueron muy pequeños. La viabilidad del protoplasto, indicada por la capacidad de excluir un colorante vital (Evan's Blue), fue inicialmente de 100 por ciento. Esto disminuyó a lo largo de un período de 40 h a 80 por ciento cuando los protoplastos se mantuvieron en 0,6M de mannitol, a 60 por ciento cuando se les mantuvo en una solución de sales inorgánicas suplementada con leche de coco y a 20 por ciento en solamente una solución de sales inorgánicas. La tasa de respiración de los protoplastos viables, medida con un electrodo de oxígeno, fue relativamente constante en una incubación de 40 h en mannitol y en solución de sales inorgánicas, pero aumentó verticalmente en presencia de leche de coco. Se consiguió por lo tanto con éxito un aislamiento de grandes números de protoplastos viables de cacao. Esos protoplastos serán valiosos para estudios de relaciones huésped-patógeno y a largo plazo para el estudio de la manipulación genética del cacao
| Main Authors: | , , , , , |
|---|---|
| Format: | biblioteca |
| Published: |
Hertford (RU) Stephen Austin and Sons
1988
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| Subjects: | THEOBROMA CACAO, PROTOPLASTOS, TECNICAS DE AISLAMIENTO, INTERACCION CELULAR, CRINIPELLIS PERNICIOSA, ENFERMEDADES FUNGOSAS, |
| Tags: |
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