Roscovitina para o atraso da progressão meiótica em oócitos de ovelhas pré-púberes

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O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da roscovitina na inibição reversível de oócitos de ovelhas pré-púberes, no estádio de vesícula germinativa (VG), e investigar a cinética da progressão da meiose após a remoção do inibidor. Complexos cumulus-oócito, recuperados de cordeiras da raça Sarda com 30–40 dias, foram cultivados por 6 horas em meio de maturação (controle) contendo 75 µmol L-1 de roscovitina (Rosco) a 38,5°C e 5% de CO2. Em seguida, os complexos foram submetidos à maturação in vitro (MIV) por 18 ou 23 horas, em meio isento de inibidor, suplementado com gonadotrofinas. A avaliação da configuração nuclear em coloração Hoescht, sob microscópio invertido de fluorescência, revelou que 88,7% dos oócitos tratados permaneceram no estágio VG, conforme observado para os imaturos (97,3%) corados após a coleta. Essa inibição foi reversível; contudo, a proporção de oócitos (83,3%) em metáfase-II, após 23 horas de MIV, foi significativamente maior do que a observada após 18 horas (29,5%), em que a meiose ainda estava em progressão com 34,2% de oócitos em metáfase-I, 11,6% de oócitos em anáfase-I e 18,5% de oócitos em telófase-I. A roscovitina é eficiente no bloqueio da maturação nuclear em oócitos de ovelhas pré-púberes; no entanto, apesar da reversibilidade, a progressão da meiose é retardada e requer mais tempo para ser concluída.

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Main Authors: Crocomo, Letícia Ferrari, Ariu, Federica, Bogliolo, Luisa, Bebbere, Daniela, Ledda, Sergio, Bicudo, Sony Dimas
Format: Digital revista
Language:eng
Published: Pesquisa Agropecuaria Brasileira 2020
Online Access:https://seer.sct.embrapa.br/index.php/pab/article/view/26742
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spelling rev-pab-br-article-267422022-05-18T18:26:38Z Roscovitina para o atraso da progressão meiótica em oócitos de ovelhas pré-púberes Roscovitine use for the delay of meiotic progression in prepubertal sheep oocytes Crocomo, Letícia Ferrari Ariu, Federica Bogliolo, Luisa Bebbere, Daniela Ledda, Sergio Bicudo, Sony Dimas Ovis aries; complexo cumulus-oócito; inibidor; cordeira; meiose; maturação nuclear Ovis aries; cumulus-oocyte complex; inhibitor; lamb; meiosis; nuclear maturation O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da roscovitina na inibição reversível de oócitos de ovelhas pré-púberes, no estádio de vesícula germinativa (VG), e investigar a cinética da progressão da meiose após a remoção do inibidor. Complexos cumulus-oócito, recuperados de cordeiras da raça Sarda com 30–40 dias, foram cultivados por 6 horas em meio de maturação (controle) contendo 75 µmol L-1 de roscovitina (Rosco) a 38,5°C e 5% de CO2. Em seguida, os complexos foram submetidos à maturação in vitro (MIV) por 18 ou 23 horas, em meio isento de inibidor, suplementado com gonadotrofinas. A avaliação da configuração nuclear em coloração Hoescht, sob microscópio invertido de fluorescência, revelou que 88,7% dos oócitos tratados permaneceram no estágio VG, conforme observado para os imaturos (97,3%) corados após a coleta. Essa inibição foi reversível; contudo, a proporção de oócitos (83,3%) em metáfase-II, após 23 horas de MIV, foi significativamente maior do que a observada após 18 horas (29,5%), em que a meiose ainda estava em progressão com 34,2% de oócitos em metáfase-I, 11,6% de oócitos em anáfase-I e 18,5% de oócitos em telófase-I. A roscovitina é eficiente no bloqueio da maturação nuclear em oócitos de ovelhas pré-púberes; no entanto, apesar da reversibilidade, a progressão da meiose é retardada e requer mais tempo para ser concluída. The objective of this work was to evaluate the efficiency of roscovitine on reversibly inhibiting oocytes from prepubertal sheep at the germinal vesicle (GV) stage, and to investigate the kinetics of meiosis progression after inhibitor removal. Cumulus-oocyte complexes, recovered from Sarda breed lambs aged 30–40 days, were cultured for 6 hours in a maturation medium (control) containing 75 µmol L-1 roscovitine (Rosco) at 38.5°C and 5% CO2. Then, the complexes were subjected to in vitro maturation (IVM) for 18 or 23 hours, in an inhibitor-free medium supplemented with gonadotropins. The evaluation of nuclear configuration by Hoescht staining, under a fluorescence-inverted microscope, showed that 88.7% of the lamb oocytes treated with roscovitine remained at the GV stage, as observed for the immature ones (97.3%) stained after collection. The inhibitory action was reversible; however, the proportion of oocytes (83.3%) at the metaphase-II stage, after 23 hours of IVM, was significantly higher than that observed after 18 hours (29.5%), in which meiosis was still in progression with 34.2% oocytes at metaphase-I, 11.6% oocytes at anaphase-I, and 18.5% oocytes at telophase-I. Roscovitine is efficient to arrest the nuclear maturation in oocytes from prepubertal sheep; however, despite the reversibility, meiosis progression is delayed, requiring more time to be completed. Pesquisa Agropecuaria Brasileira Pesquisa Agropecuária Brasileira Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (Fapesp) Pró-Reitoria de Pesquisa of Universidade Federal de Minas Gerais Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (Fapesp) Pró-Reitoria de Pesquisa of Universidade Federal de Minas Gerais 2020-09-02 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf https://seer.sct.embrapa.br/index.php/pab/article/view/26742 Pesquisa Agropecuaria Brasileira; V.55, Jan./Dec., 2020: Publicação contínua em volume anual; e01585 Pesquisa Agropecuária Brasileira; V.55, Jan./Dec., 2020: Publicação contínua em volume anual; e01585 1678-3921 0100-104x eng https://seer.sct.embrapa.br/index.php/pab/article/view/26742/14742 Direitos autorais 2020 Pesquisa Agropecuária Brasileira
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