Prospección, detección y caracterización de lectinas de Labiadas de Colombia.

La familia Labiatae está representada en Colombia por un alto número de especies (muchas de ellas endémicas) que presentan un gran interés tanto botánico, como quimiotaxonómico, bioquímico y eventualmente industrial . El conocimiento de la especies colombianas es todavía parcial particularmente en lo que respecta a las lectinas de semilla que poseen la capacidad de reconocer específicamente el antígeno Tn que se expresa en ciertos tipos de células tumorales. Gracias al estudio sistemático adelantado en la primera fase de esta investigación (Proyecto código 1101-05-10298) se ha avanzado considerablemente en términos de la prospección y detección de lectinas de Labiadas, su caracterización bioquímica y la exploración de las interacciones de la lectina de Salvia bogotensis con la línea celular MCF-7 que presenta el antígeno Tn en su superficie. (Ver informe técnico final primera fase). No hay información sobre la interacción de esta lectina con diferentes líneas celulares de origen tumoral o con cultivos primarios donde eventualmente una de sus características sea la presencia temporal del antígeno. Adquirido este conocimiento la lectina podría usarse para evaluar la eventual progresión de la aparición del antígeno Tn en carcinomas humanos en diferentes estadios ;para ello el cáncer de vejiga se ha seleccionado como modelo ya que ha sido poco estudiado en este aspecto y permite el uso de técnicas no invasivas para la recolección de muestras. Adicionalmente resta realizar una prospección en ciertas zonas del país que se caracterizan por poseer especies endémicas y caracterizar molecularmente en forma detallada una lectina aislada de un género diferente a Salvia para disponer de una fuente alternativa para adelantar estudios con células. Este estudio permitirá profundizar en el desarrollo de una herramienta para uso clínico como una alternativa de bajo costo y aprovechar un recurso genético en el cual Colombia es particularmente rica. Objetivo general Caracterización molecular y funcional de lectinas presentes en Labiadas colombianas para evaluar su utilización en el reconocimiento del antígeno Tn. Objetivos específicos 1. Continuar con la localización de las poblaciones, muestreo de semillas ,colección de especímenes testigo e identificación precisa de las diferentes especies incluyendo especies aclimatadas de interés económico (ornamental, medicinal, hortícola). 2. Detectar lectinas en las diferentes especies colectadas y establecer,con las especies preseleccionadas, la especificidad de la lectina para eritrocitos de tipo Tn. 3. Completar la caracterización bioquímica de la lectina de Lepechinia bullata. 4. Identificar la (s) eventual (es) glicoproteína(s) de membrana de MCF-7 responsable(s) de la interacción con la lectina de S. bogotensis. 5. Caracterizar funcionalmente la lectina de S. bogotensis respecto a su interacción con diversas líneas de células tumorales, cultivos primarios y cortes de tejidos de ratón adulto. 6. Realizar ensayos exploratorios con células de tumores de vejiga. Enfoque metodológico Prospección y recolección de muestras Detección de lectinas por ELISA y establecimiento de especificidad para eritrocitos Tn Caracterización bioquímica de la lectina de Lepechinia bullata - Extracción , purificación y determinación de actividad (ELISA) de la lectina - Comportamiento por afinidad sobre ConA-Sepharosa - Separación de subunidades por electroforesis preparativa nativa y desnaturalizante - Determinación de Peso molecular ,secuencia N-terminal, puentes S-S y cisteína - Reconocimiento por anticuerpos heterólogos anti-lectina S. bogotensis (SBL) Reconocimiento de glicoproteínas de membrana de MCF-7 por la lectina SBL - Obtención de las glicoproteínas de membrana. - Cromatografía de afinidad sobre SBL acoplada a Sepharosa. - Detección de las glicoproteínas por tinciones específicas sobre geles.