Transformation du champignon ectomycorhizien Hebeloma cylindosporum par Agrobacterium tumefaciens
Bien qu'Agrobacterium tumefaciens ne soit pas pathogène des champignons, il peut transférer l'ADNT de son plasmide Ti à des cellules fongiques qui l'intègrent dans leur ADN génomique. Cette propriété est à l'origine du récent développement d'une méthode de transformation des espèces fongiques qui présente plusieurs avantages par rapport aux méthodes traditionnelles utilisant des plasmides circulaires ou linéaires. D'une part, elle ne nécessite pas la préparation de protoplastes et d'autre part le mode d'intégration de l'ADN-T dans l'ADN génomique permet de caractériser facilement les séquences génomiques flanquantes. Peu de Basidiomycètes ont pour l'instant été transformés en utilisant cette bactérie. Nous décrivons ici une méthode de transformation génétique d'Hebeloma cylindrosporum, Basidiomycète ectomycorhizien, par A. tumefaciens. Une analyse par PCR et Southern blot a montré que tous les transformants obtenus (treize pour l'instant) ne possèdent qu'une seule copie de l'ADN-T intégrée. Une analyse par TAIL PCR nous a permis d'identifier les sites d'intégration de ces insertions. Cette méthode est actuellement utilisée au laboratoire pour obtenir des mutants non mycorhiziens d'H. cylindrosporum. Les résultats présentés ici montrent que l'identification des gènes inactivés est plus facile que dans le cas de la mutagenèse par insertion de plasmide. (Texte intégral)
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dig-cirad-fr-4907372024-01-28T10:24:45Z http://agritrop.cirad.fr/490737/ http://agritrop.cirad.fr/490737/ Transformation du champignon ectomycorhizien Hebeloma cylindosporum par Agrobacterium tumefaciens. Combier Jean-Philippe, Melayah Delphine, Marmeisse Roland, Gay Gilles. 2002. In : Journées Jean Chevaugeon : IVe rencontres de phytopathologie - mycologie du 13 au 17 mars 2002. [Résumés]. CIRAD-MIDEC, INRA, CNRS, SFP. Montpellier : CIRAD, Résumé, 1 p. Journées Jean Chevaugeon, Rencontres de phytopathologie-mycologie. 4, Aussois, France, 13 Mars 2002/17 Mars 2002. Transformation du champignon ectomycorhizien Hebeloma cylindosporum par Agrobacterium tumefaciens Combier, Jean-Philippe Melayah, Delphine Marmeisse, Roland Gay, Gilles fre 2002 CIRAD Journées Jean Chevaugeon : IVe rencontres de phytopathologie - mycologie du 13 au 17 mars 2002. [Résumés] P34 - Biologie du sol Hebeloma transformation génétique Agrobacterium tumefaciens http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_31708 http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_3220 http://aims.fao.org/aos/agrovoc/c_27444 Bien qu'Agrobacterium tumefaciens ne soit pas pathogène des champignons, il peut transférer l'ADNT de son plasmide Ti à des cellules fongiques qui l'intègrent dans leur ADN génomique. Cette propriété est à l'origine du récent développement d'une méthode de transformation des espèces fongiques qui présente plusieurs avantages par rapport aux méthodes traditionnelles utilisant des plasmides circulaires ou linéaires. D'une part, elle ne nécessite pas la préparation de protoplastes et d'autre part le mode d'intégration de l'ADN-T dans l'ADN génomique permet de caractériser facilement les séquences génomiques flanquantes. Peu de Basidiomycètes ont pour l'instant été transformés en utilisant cette bactérie. Nous décrivons ici une méthode de transformation génétique d'Hebeloma cylindrosporum, Basidiomycète ectomycorhizien, par A. tumefaciens. Une analyse par PCR et Southern blot a montré que tous les transformants obtenus (treize pour l'instant) ne possèdent qu'une seule copie de l'ADN-T intégrée. Une analyse par TAIL PCR nous a permis d'identifier les sites d'intégration de ces insertions. Cette méthode est actuellement utilisée au laboratoire pour obtenir des mutants non mycorhiziens d'H. cylindrosporum. Les résultats présentés ici montrent que l'identification des gènes inactivés est plus facile que dans le cas de la mutagenèse par insertion de plasmide. (Texte intégral) conference_item info:eu-repo/semantics/conferenceObject Conference info:eu-repo/semantics/closedAccess http://agritrop.cirad.fr/490177/ |
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Bien qu'Agrobacterium tumefaciens ne soit pas pathogène des champignons, il peut transférer l'ADNT de son plasmide Ti à des cellules fongiques qui l'intègrent dans leur ADN génomique. Cette propriété est à l'origine du récent développement d'une méthode de transformation des espèces fongiques qui présente plusieurs avantages par rapport aux méthodes traditionnelles utilisant des plasmides circulaires ou linéaires. D'une part, elle ne nécessite pas la préparation de protoplastes et d'autre part le mode d'intégration de l'ADN-T dans l'ADN génomique permet de caractériser facilement les séquences génomiques flanquantes. Peu de Basidiomycètes ont pour l'instant été transformés en utilisant cette bactérie. Nous décrivons ici une méthode de transformation génétique d'Hebeloma cylindrosporum, Basidiomycète ectomycorhizien, par A. tumefaciens. Une analyse par PCR et Southern blot a montré que tous les transformants obtenus (treize pour l'instant) ne possèdent qu'une seule copie de l'ADN-T intégrée. Une analyse par TAIL PCR nous a permis d'identifier les sites d'intégration de ces insertions. Cette méthode est actuellement utilisée au laboratoire pour obtenir des mutants non mycorhiziens d'H. cylindrosporum. Les résultats présentés ici montrent que l'identification des gènes inactivés est plus facile que dans le cas de la mutagenèse par insertion de plasmide. (Texte intégral) |
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