Analysis of genetically transformed coffee plants (Coffea canephora Pierre) for resistance to coffee leaf miner : bioassays, molecular and immunological analyses

Soixante plantes transgéniques de caféiers (Coffea canephora) ont été obtenues à l'aide de constructions contenant un gène de Bacillus thuringiensis efficace contre les Lépidoptères (cryIA(c)). Leur analyse moléculaire (Southern blots et PCR) a été réalisée, y compris l'analyse de la qualité de l'intégration du T-DNA et l'estimation du nombre de copies de gènes insérés. Ces plantes ont également fait l'objet de bioessais et d'études de la présence de protéines toxiques par immunodétection ("Westen blotting"). Pour les bioessais, les plantes ont été mises 24 heures en présence de mineuses Tanzaniennes adultes (Leucoptera caffeina) et évaluées deux semaines plus tard. Afin de réaliser les analyses biochimiques, les protéines ont été extraites à partir des mêmes plantes, concentrées et dosées. Après migration et transfert sur une membrane de nitrocellulose, la protéine CrylA(c) a été recherchée par réaction avec un anticorps polyclonal développé chez le lapin. La plupart des plantes ont une seule copie du T-DNA. Les résultats obtenus permettent de faire des commentaires sur l'expression du transgène; celle-ci varie dans les bioessais, mais cette variation n'est pas toujours bien mise en évidence par les tests Western. Une interprétation des résultats sera présentés ainsi que des hypothèses sur les types d'anticorps à utiliser dans les études futures.