Purificación y caracterización de la α-amilasa del hepatopáncreas de la langosta espinosa Panulirus argus (Latreille, 1804).

Estudios en diferentes grupos de animales apuntan a que el polimorfismo en las enzimas amilolíticas está relacionado con el desempeño de los organismos en cautiverio. Aunque se ha sugerido que el efecto del polimorfismo se debe fundamentalmente a diferencias en los niveles de expresión génica, también se ha podido demostrar que el efecto en las amilasas se debe a las características bioquímicas de las mismas. Los estudios derivados de la purificación y caracterización de las diferentes isoformas presentes en una misma especie de crustáceo, podrían contribuir al conocimiento de la fisiología digestiva de estos invertebrados. Hasta la fecha, la mayoría de los estudios que purifican y caracterizan las α-amilasas en los crustáceos en general, no solo son insuficientes, sino que en su mayoría datan de más de tres décadas y no abordan las causas o el significado biológico del polimorfismo encontrado para estas enzimas. Combinando cromatografía de gel filtración e intercambio aniónico se purificó por primera vez la isoforma de menor movilidad con un peso molecular relativo de 60 kDa, a partir del hepatopáncreas de la langosta. Se obtuvo un factor de purificación de 1144 y un grado de pureza de 75,3%. La enzima alcanza el máximo valor de actividad a pH 5.5, 0,3 M de NaCl y 25 mM CaCl2. Con el aumento de la temperatura (de 25 a 55ºC) se incrementa la actividad enzimática, mientras que la estabilidad en el tiempo se ve comprometida por encima de los 30ºC. Usando el CNP-G3 como sustrato la Km es de 0,36 ± 0.052 mM, con Vmax de 0.56 ± 0.024 mM mL-1min-1 y kcat de 28.42 ± 1.203 s-1. Se demuestra que esta proteína puede dar lugar a dos isoenzimas en algunos individuos por glicosilación.

Bibliographic Details

Main Author:	Casuso Cabrera, Antonio
Format:	Thesis/Dissertation biblioteca
Language:	Spanish / Castilian
Published:	Centro de Investigaciones Marinas, Universidad de La Habana 2016
Subjects:	Panulirus argus, Isoforms, Glycosylation, Purification, Km, Vmax, Biochemical characterization, Isoformas, Glicosilación, Purificación, Caracterización bioquímica,
Online Access:	http://hdl.handle.net/1834/9864
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