Troca de carioplastos entre zigotos ativados com estrôncio ou 6-DMAP.

A ativação oocitária constitui importante etapa dos procedimentos de transferência nuclear e injeção espermática intracitoplasmática. Dessa maneira, toma-se necessária a busca por tratamentos de ativação eficientes e que promovam o efeito mais semelhante possivel ao desencadeado pelo espermatozóide. Neste trabalho, avaliamos o efeito da troca de carioplasto entre zigotos produzidos por dois tratamentos de ativação diferentes sobre o desenvolvimento embrionário inicial. Para tanto, oócitos bovinos foram maturados in vitro por 24h em TCM 199 com 10% de SFB, 1 ug/mL de FSH, 50ug/mL de hCG e 1 ug/ mL de estradiol, desnudados com hialuronidase (0,5% por 5min) e ativados com ionomicina (5~M por 5min) seguida de estrôncio (20mM SrCI2 e 1 O~g/mL de citocalasina D, por 6h; tratamento S) ou 6-DMAP (2mM por 4h; tratamento D). Após 16 a 24h, os zigotos foram centrifugados (15,000xg por 15min), avaliados quanto à presença de pronúcleo e submetidos à transferência de carioplasto (TC): remoção de carioplasto de um zigoto e transferência para outro zigoto previamente enucleado, em microscópio invertido com micromanipuladores. A TC realizada no mesmo zigoto produziu os grupos controle TC-S e TCD, enquanto a TC entre tratamentos produziu embriões com citoplasma estrôncio e núcleo 6-DMAP (CSND) e citoplasma 6- DMAP e núcleo estrôncio (CDNS). Os embriões reconstituldos por 2 pulsos elétricos de 1,5kV/cm por 30~seg foram cocultivados com células da granulosa em SOF com 2,5% de SFB e 3mg/mL de BSA, avaliados quanto às taxas de clivagem (46 a 48h) e desenvolvimento até oito-células (Dia 4) e blastocisto (Dia 7) e analisados pelo teste de Qui-quadrado. Os procedimentos de cultivo foram realizados em gotas de 100~L cobertas por óleo mineral a 38,5°C e 5% de CO2 em ar, e os meios foram suplementados com O,2mM de piruvato e 83,5ug/mL de amicacina. A clivagem foi semelhante (p>0,05) entre os tratamentos TC-S (73,6%), TC-D (73,3%), CSND (76,5%) e CDNS (69,5%). Em relação às taxas de oito-células, TC-S (60%) foi similar (p>O,05) a TC-D (68,4%) e CSND (36,4%); enquanto CSND foi inferior (p<O,05) a TC-D; e CDNS (25%) foi inferior (p<O,05) a todos os grupos. A taxa de blastocisto em TC-D (31,7%) foi superior (p<0,05) a TC-S (7,3%), CSND (6,8%) e CDNS (4,9%). Observamos que o grupo CDNS comportou-se de maneira semelhante ao grupo TC-S. Entretanto, contrário a nossas expectativas, o grupo CSND foi inferior a TC-D, sugerindo efeito negativo do citoplasma estrôncio sobre o carioplasto 6-DMAP, assim como do carioplasto estrôncio sobre o citoplasma 6-DMAP. Além disso, enquanto nos tratamentos TC-S e TCD a queda nas taxas de desenvolvimento só foi significativa (p<0,05) do estádio de oito-células até blastocisto, nos grupos CSND e CDNS as taxas caíram (p<0,05) tanto de duas- até oito-células quanto até blastocisto. Esse aumento do bloqueio no estádio de oito-células pode refletir as diferenças exist.entes entre os tratamentos estrôncio e 6-DMAP. que poderiam levar à incompatibilidade núcleo-citoplasmática. Acreditamos que esse efeito prejudicial do estrôncio seja mediado por sua ação no citoplasma, no entanto, novos estudos serão necessários para a confirmação dessa hipótese e para a identificação dos fatores citoplasmáticos responsáveis por esse efeito.

Bibliographic Details

Main Authors:	NICIURA, S. C. M., FERREIRA, C. R., PERECIN, F., SARAIVA, N. Z., TETZNER, T. A. D., BORGES, J. C., YAMAZAKI, W., LEAL, C. L. V., MEIRELLES, F. V., GARCIA, J. M.
Other Authors:	SIMONE CRISTINA MEO NICIURA, CPPSE.
Format:	Separatas biblioteca
Language:	pt_BR por
Published:	2007-09-05
Subjects:	Transferência nuclear, Ativação oocitária,
Online Access:	http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/48359
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