Isolation of protoplasts from Crinipellis perniciosa, causative agent of witches' broom disease of cocoa (Theobroma cacao L.)

Se describe en este artículo un método de aislamiento de los protoplastos a partir de la etapa saprófita del Basidiomiceto patógeno Crinipellis perniciosa con objeto de obtener un material útil para el estudio fisiológico del hongo. Así, se han constituido cultivos líquidos de C. perniciosa tomando como punto de partida un inóculum micelial fragmentado, con objeto de conseguir un material para el aislamiento de los protoplastos. Durante un periodo de incubación de diez días se ha procedido a la evaluación del aumento del peso seco, así como de la aptitud para la formación de protoplastos. El micelium formado entre los días cuarto y octavo (periodo correspondiente a aquel del crecimiento activo en cultivo líquido) ha demostrado ser el más apto para la liberación de protoplastos. Se han conseguido los rendimientos más elevados a partir de micelium tras siete días de crecimiento, utilizando 4 mg.cm exponente -3 de NovoZym 234 estabilizado con 0,5 M KCl en 0,1 M de solución tampón fosfato de un pH 5,8. Una mejor agitación, realizada por incorporación de perlas de vidrio a la mezcla lítica, ha permitido aumentar los rendimientos de protoplastos liberados. Los protoplastos se han tomado, con todo éxito, de la mezcla lítica por filtración y liberados del enzima lítico por lavado y centrifugación. Un 41 por ciento de estos protoplastos recogidos estaban uninucleados y un 7 por ciento binucleados. El método descrito representa una técnica eficaz y segura para aislar protoplastos a partir del micelium de C. perniciosa

Bibliographic Details

Main Authors:	124304 Thompson, W., 79926 Isaac, S., 58370 Collin, H.A., 76097 Hardwick, K.
Format:	biblioteca
Published:	1986
Subjects:	THEOBROMA CACAO, CRINIPELLIS PERNICIOSA, ENFERMEDADES FUNGOSAS, AISLAMIENTOS, PROTOPLASTOS, MICELIO, METODOS,
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