Isolation of protoplasts from cocoa (Theobroma cacao L.) leaves

Se han estudiado los factores que ejercen influencia en cuanto al aislamiento de protoplastos de hojas de cacao (Theobroma cacao L.). Algunas porciones de jóvenes hojas en su etapa precoz de expansión F-2 se han expuesto a la Pectoliasa 0,1, 1,0 o 5,0 por ciento en combinación con la celulisina a 2 o 4 por ciento durante cinco horas, con temperaturas de incubación de 25, 30 y 35 grados centígrados. A los 30 y 35 grados centígrados, la liberación de los protoplastos ha sido reducida para todas las concentraciones de enzimas, mientras que, por otro lado, se han obtenido rendimientos elevados a 25 grados centígrados con la pectoliasa 1 por ciento y la celulisina a 2 por ciento. La plasmólisis de las hojas antes de su exposición a la mezcla lítica no ha tenido efecto alguno con respecto al rendimiento de protoplastos. Unicamente se han llegado a obtener rendimientos significativos a partir de hojas de jóvenes brotes (superficie de 10-20 cm2). En etapas más precoces o más tardías de la expansión, se ha observado una reducida liberación de protoplastos o bien ninguna liberación. Los protoplastos aislados han mostrado una ligera disminución de viabilidad, pero en cambio, ninguna alteración significativa del coeficiente de respiración durante la incubación en el manitol-0, 6 M se ha puesto de manifiesto, y ello durante 40 horas. Este género de preparaciones estables de protoplastos constituye un material ideal para los estudios fisiológicos