Método simple para la detección múltiple de viroides de cítricos
Resumen La detección de viroides mediante RT-PCR en México es de uso común en los laboratorios de acreditación para determinar la calidad sanitaria de plantas de cítricos, cuando se van a utilizar árboles madre para propagar plantas de vivero. En el presente trabajo se describe una metodología simple para la detección múltiple de los viroides Citrus exocortis viroid (CEVd), CVd II, y Citrus viroid III (CVd III) en una sola reacción de RT-PCR. La extracción de ácidos nucleicos se efectuó con cantidades mínimas (250 mg) de tejido, y adicionando 1% polivinilpirrolidona en la solución salina de extracción de glicina-fosfato. La detección de los tres viroides fue exitosa cuando las reacciones de RT se efectuaron con 2.0 μg de ARN, 1.0-1.5 mM de dNTP’s, 0.90 μM, del iniciador complementario (C) para CEVd, y 0.49 μM para los correspondientes iniciadores C para CVd II y CVd III, respectivamente, seguidas por reacciones de PCR con 2-4 μL de cADN procedente de RT y 10, 5, 5 pmoles del juego de iniciadores homólogos (H) y C para CEVd, CVd II y CVd III. Al usar menos de 1.0 μM de dNTP’s, así como cantidades iguales de los iniciadores C en las reacciones de RT y cantidades iguales del juego de iniciadores C y H para CEVd and CVd II y CVd III en las reacciones de PCR, proporcionaron detección simultánea confiable para CVd II y CVd III, pero resultados erráticos con CEVd.
| Main Authors: | , , , , |
|---|---|
| Format: | Digital revista |
| Language: | Spanish / Castilian |
| Published: |
Colegio de Postgraduados
2007
|
| Online Access: | http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1405-31952007000100087 |
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| Summary: | Resumen La detección de viroides mediante RT-PCR en México es de uso común en los laboratorios de acreditación para determinar la calidad sanitaria de plantas de cítricos, cuando se van a utilizar árboles madre para propagar plantas de vivero. En el presente trabajo se describe una metodología simple para la detección múltiple de los viroides Citrus exocortis viroid (CEVd), CVd II, y Citrus viroid III (CVd III) en una sola reacción de RT-PCR. La extracción de ácidos nucleicos se efectuó con cantidades mínimas (250 mg) de tejido, y adicionando 1% polivinilpirrolidona en la solución salina de extracción de glicina-fosfato. La detección de los tres viroides fue exitosa cuando las reacciones de RT se efectuaron con 2.0 μg de ARN, 1.0-1.5 mM de dNTP’s, 0.90 μM, del iniciador complementario (C) para CEVd, y 0.49 μM para los correspondientes iniciadores C para CVd II y CVd III, respectivamente, seguidas por reacciones de PCR con 2-4 μL de cADN procedente de RT y 10, 5, 5 pmoles del juego de iniciadores homólogos (H) y C para CEVd, CVd II y CVd III. Al usar menos de 1.0 μM de dNTP’s, así como cantidades iguales de los iniciadores C en las reacciones de RT y cantidades iguales del juego de iniciadores C y H para CEVd and CVd II y CVd III en las reacciones de PCR, proporcionaron detección simultánea confiable para CVd II y CVd III, pero resultados erráticos con CEVd. |
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