Perfil de metilação do éxon 1 do gene XIST em células da linhagem espermatogênica de bovinos.
Embriões de mamíferos sofrem duas ondas de reprogramação, uma no zigoto, onde os genomas matemos e paternos são desmetilados e em seguida metilados de novo, e outra nas células germinativas primordiais. Acredita-se que a metilação de novo nas células germinativas masculinas esteja estabelecida ainda antes do nascimento, no entanto, como e quando esse processo ocorre em bovinos ainda não foi estabelecido. Sendo assim, este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de verificar se há reprogramação epigenética durante a espermatogênese através da avaliação do perfil de metilação da região do éxon I do gene XIST em diferentes células espermáticas. Foram utilizados espermatócitos, espermátides alongadas e espermatozóides da cabeça e cauda do epidídimo coletados de testículos obtidos em abatedouro. As células coletadas tiveram o seu DNA extraído e em seguida tratado com bissulfito de sódio. O DNA tratado foi amplificado através de PCR nested, e o produto amplificado foi inserido em um vetor e clonado em bactérias. O DNA plasmidial foi extraído e sequenciado. As sequências do experimento foram comparadas com a sequência do gene XIST depositada no GenBank, e aquelas que apresentaram taxa de conversão do bissulfito de sódio menor ou igual a 95% e homologia menor ou igual a 97% com a sequência do GenBank foram utilizadas. Para a comparação do nível de metilação entre os grupos foram utilizados os testes de Kruskal- Wallis e Mann-Whitney, com nível de significância de P<O,05. O grupo dos espermatócitos, espermátides alongadas, espermatozóides de cauda e cabeça de epidídimo apresentaram 15,70%±14,54, 1,96%±1,96, 74,09%±6,78 e 45,09%±20,19 de metilação, respectivamente, sendo que o grupo da cabeça de epidídimo apresentou-se mais metilado do que os grupos espermatócitos e espermátides alongadas (P<O,Ol). Quando foram formados e comparados dois grupos, um com espermatócitos e espermátides alongadas, e outro com espermatozoides de cabeça e cauda de epidídimo, a análise mostrou haver diferença entre eles (P<O,OI) com relação a percentagem de metilação. Os resultados sugerem que a reprogramação epigenética em bovinos ainda está ocorrendo durante a formação do espermatozóide.
| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Teses biblioteca |
| Language: | pt_BR por |
| Published: |
2014-08-20
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| Subjects: | Reprogramação epigenética, Bissulfito de sódio., Bovino, Espermatogênese., |
| Online Access: | http://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/992957 |
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